家蝇防御素的基因克隆与重组表达

摘要

该研究选取家蝇(Musca domestica)为实验材料,在实验室已有基础上,成功克隆到家蝇防御素基因的全长cDNA,并在大肠杆菌GST融合蛋白表达系统成功表达了家蝇防御素成熟肽的融合蛋白GST-Mdde,且检测到有抑菌活性,另外,构建了毕赤甲醇酵母(Pichia pastoris)表达系统重组m-Mdde/pAO815的多拷贝载体.根据已报道昆虫防御素氨基酸的保守序列,设计简并引物,以家蝇cDNA文库为模板,PCR扩增得到一1119bp的防御素基因cDNA片段,再以特异性引物、λgtll的下游引物及cDNA接头为引物进行PCR扩增,得到了430bp的全长cDNA序列,命名为Mdde,通过Internet生物信息学资源进行序列分析,结果表明具有完整的编码框,编码一个具有92个氨基酸的防御素前体蛋白,与其他昆虫防御素的相似性为51﹪~73﹪,其中第1~22个氨基酸残基为信号肽,成熟肽由40个残基(53~92)组成.成熟肽分子量为4.0kDa,等电点为8.69,有1个带负电荷的氨基酸残基和4个带正电荷的氨基酸残基.同时还对成熟肽的二级结构进行了推测,具有昆虫防御素典型的CSαβ基序.

目录

声明

符号说明

第一部分综述

1.抗菌肽多样性

2.防御素类抗菌肽

3.抗菌肽杀菌的作用机理及基因调控

4.抗菌肽的分离纯化、基因克隆、重组表达与活性检测

5.抗菌肽的应用前景及论文研究意义

第二部分家蝇防御素基因的cDNA克隆与序列分析

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第三部分家蝇防御素成熟肽在大肠杆菌中的表达

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第四部分家蝇防御素成熟肽在Pichia酵母中的表达

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

论文总结

参考文献

致谢

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