通心络喷雾剂的研制及家兔体内动力学研究

摘要

目的：探索中医药治疗冠心病、心绞痛的速效中药新剂型、新制剂、新技术和新方法，以中医药理论为指导，以临床治疗冠心病、心绞痛的中医临床经验方剂为基础，采用现代药物制剂技术，提取药材有效成分，优化筛选制备工艺，研制中药速效喷雾剂；建立质量控制方法和标准，研究喷雾剂动物体内动力学并对喷雾剂临床使用的安全性进行初步评价试验。对发掘中国医药学宝库，发挥传统中药的特色和优势，加速我国传统中药制剂现代化研究发展进程具有重要意义。 方法：采用均匀设计优化筛选通心络喷雾剂中丹参、延胡索、人参药材的提取工艺，以提取溶剂浓度、提取次数及提取时间为主要影响因素，以丹参主要有效成分(丹参酮ⅡA)提取率为指标，采用多元回归、方差分析优化提取工艺；利用分子包合技术将冰片用羟丙基-β-环胡精(HP-β-CD)包合，以改善其在制剂中的溶解性和稳定性，以包合率为指标，通过正交设计和方差分析对包合工艺进行筛选；采用高效液相色谱(HPLC)方法对丹参中主要有效成分丹参酮ⅡA(TS)进行测定，用气相色谱(GC)方法对冰片进行测定，建立质量控制方法和标准；以主要有效成分(TS)含量为检测指标，对通心络喷雾剂进行家兔体内动力学研究及急性毒性试验和局部给药粘膜刺激性试验等用药安全性进行初步研究。 结果：以TS含量为指标，对影响提取工艺的主要因素乙醇提取液的浓度、提取次数和提取时间采用均匀设计优化处理，得回归方程为Y=-1.596772+0.02724111A+0.05631667B(r=0.9166)F=15.78915S=0.03897f1=8f2=2N=9F0.05(8，2)=4.46F＞F0.05(8,2)，说明回归方程是可信的，其优化区间为0.0968mg/ml±0.07638mg/ml。且乙醇浓度、提取次数与TS含量成正比，而提取时间在1～3个小时内无显著影响，计算机处理得出结果为A：89.99％B：2.97C：1.18，因此，选择提取方法的优化条件是A：乙醇浓度=90％B：提取次数=3次C：提取时间=1.2小对。 通过正交试验设计对冰片包合工艺优化筛选，以包合率为指标，对HP-β-CD与冰片用量(A)、包合温度(B)、包合时间(C)进行考察，各因素作用主次顺序为C＞B＞A，包合时间、包合温度的影响具有非常显著性意义(P＜0.01)，HP-β-CD：冰片量的影响具有显著性意义(P＜0.05)。选择HP-β-CD与冰片用量的比例4：0.7、包合温度45℃、包合时间1小时为最佳包合工艺。制得较满意的喷雾剂混悬液。 建立了TS的HPLC含量测定方法，浓度在0.0192～0.096mg/ml范围内线性关系良好(r=0.9991)，日内精密度的RSD小于2％，平均回收率为99.40％±3.08％。建立了冰片的GC含量测定方法，浓度在0.6072～7.2864mg/ml之间成良好的线形关系(r=0.9968)，日内精密度的RSD小于1％，平均回收率97.88％±3.19％。 家兔体内动力学表明，家兔鼻腔喷雾和口腔灌胃给药，采用3P87程序分别拟合，根据拟合优度结合AIC进行模型判断，鼻腔及灌胃给药在血中动力学行为可用双室模型描述，具有双室模型特征。药-时曲线下面积(AUC)分别为鼻腔给药7.582(μg/ml)h、灌胃给药6.75(μg/ml)h；吸收速度常数(ka)分别为鼻腔给药1.522、灌胃给药0.646；运转常数K12和K10分别为鼻腔给药0.520和0.478、灌胃给药0.032和0.189；达峰时Tmax及达峰浓度Cmax分别为鼻腔给药0.985h、1.68μg/ml和灌胃给药2.84h、0.740μg/ml。可见鼻腔喷雾给药吸收、转运速度明显高于灌胃给药；达到血药浓度高峰值的时间明显短于灌胃给药。 急性毒性试验结果表明，鼻腔给予家兔通心络喷雾剂，每日给药量2.1g/kg,相当于60kg成人一日临床用药量的80倍，未见明显急性毒性反应，表明本品鼻腔喷雾给药毒性较小。动物局部刺激性试验表明，通心络喷雾剂每天家免鼻腔喷雾给药一次，连续给药7天，对家免鼻粘膜无明显刺激作用。 结论：采用现代药物制剂技术，以中医药理论为指导，将临床治疗冠心病、心绞痛的临床经验方剂制成速效通心络喷雾剂新剂型，组方、剂型设计科学合理；采用均匀设计优化药材提取工艺，以分子包合技术将易挥发、难溶性药物冰片制成包合物，提高了稳定性和溶解度；建立了HPLC与GC方法测定通心络喷雾剂含量的质量控制方法和标准，方法先进、质量可控；通过动物体内初步药物动力学研究、急性毒性试验、局部刺激性试验表明，制得通心络速效喷雾剂安全、无毒，具有理想的临床应用前景。该研究目前国内外尚未见报道。

目录

符号说明

前言

第一部分通心络喷雾剂处方设计及文献考证

1制剂处方及中医理论阐述

1.1处方组成

1.2命名依据

1.3方解

2处方药物现代研究

3剂型分析

第二部分通心络喷雾剂制备工艺研究

1实验材料

1.1仪器

1.2材料与试剂

2丹参、延胡索、人参提取工艺研究

2.1检测指标的确定

2.2TS含量测定方法的建立

2.3提取工艺考察

3冰片包合物的制备

3.1包合率测定方法的建立

3.2冰片包合物工艺条件的考察

4通心络喷雾剂的制备

4.1处方与制备工艺

4.2喷雾剂混悬液的制备

4.3乙醇含量的测定

4.4喷雾剂的灌装

5工艺流程图

6结果与讨论

第三部分通心络喷雾剂质量标准的研究及制剂稳定性考察

1TS的含量测定方法

1.1仪器及试药

1.2色谱条件及测定方法

1.3线性关系的考察

1.4精密度试验

1.5加样回收率实验

1.6稳定性考察

2冰片含量测定的方法

2.1仪器及试药

2.2色谱条件及测定方法

2.3线性关系的考察

2.4精密度试验

2.5加样回收率实验

2.6稳定性考察

3通心络喷雾剂质量标准的建立

3.1质量标准

3.2样品检测

4心痛喷雾剂的稳定性考察

4.1性状考察

4.2喷射试验

4.3乙醇量考察

4.4TS含量测定考察

4.5冰片含量测定考察

4.6小结

5结果与讨论

第四部分通心络喷雾剂兔体内药物动力学研究

1材料和仪器

1.1试剂与药品

1.2仪器

1.3动物与饲料

2 HPLC法测定家兔血浆中TS浓度方法的建立与结果

2.1TS血药浓度测定方法

2.2血浆中TS含量测定标准曲线的建立

2.3精密度试验

2.4加样回收率实验

2.5稳定性考察

3 TS在家兔体内药代动力学研究

4结果与讨论

第五部分通心络喷雾剂的急性毒性及安全性试验

1材料、仪器与动物

1.1受试物

1.2仪器

1.3实验动物及饲料

2急性毒性试验

2.1试验方法

2.2试验结果

2.3结论

3局部刺激性试验

3.1试验方法

3.2动物实验

3.3结论

全文结论

参考文献

致谢

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