ARHI基因在卵巢肿瘤组织中的表达及组蛋白去乙酰化酶抑制剂对其影响的研究

摘要

目的：观察印迹抑癌基因ras同源家族I(A ras homologue member I，ARHI)在卵巢肿瘤组织中的表达分布特点，并探讨其与卵巢肿瘤的组织学分型和恶性肿瘤临床分期的关系。同时利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylaseinhibitors,HDACIs)干预卵巢癌细胞株的生长，观察细胞生长抑制率，探讨HDACIs对卵巢癌细胞株中ARHI基因表达的影响。 方法 1、所取卵巢肿瘤组织均为新鲜标本，正常卵巢组织10例、卵巢良性肿瘤13例、卵巢交界性肿瘤5例、卵巢恶性肿瘤33例，取后置于-80℃保存。利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测ARHI的mRNA表达，分析比较ARHI基因表达与肿瘤良、恶性及卵巢恶性肿瘤临床分期、肿瘤组织学分型的关系。 2、组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)有效抑制细胞中组蛋白去乙酰化酶，曲谷抑菌素(Trichostain A,TSA)是其中一种高效抑制剂。选取卵巢肿瘤四种细胞株：COCl为悬浮细胞，SKOV3、A2780、OC3为贴壁细胞，四种均属卵巢肿瘤恶性程度较高的细胞系。采用四甲基偶氮唑蓝MTT比色法检测不同浓度TSA和顺铂对四种卵巢癌细胞系体外生长的抑制作用。应用RT-PCR技术检测卵巢癌细胞自然生长组和药物作用组中ARHI mRNA的表达水平。 结果 1、ARHI基因与卵巢恶性肿瘤病理生物学特征的相关性研究。不同程度不同分型的卵巢肿瘤组织中ARHI基因表达存在不同的差异。 (1)正常卵巢组织中ARHI基因的表达阳性率为100％(10/10)；13例卵巢良性肿瘤中10例表达阳性(77％，10/13)，3例表达缺失(23％，3/13)。5例交界性肿瘤中3例ARHI表达为阳性，2例表达缺失，缺失率为40％(2/5)。33例恶性肿瘤组织中仅有11例有表达，缺失率为67％(11/33)。 (2)ARHI基因的表达与卵巢肿瘤的良、恶性有关，与卵巢恶性肿瘤的组织学分型无关(p>O.05)，与卵巢肿瘤临床分期有关(pO.05)。其它三组进行两两比较，无显著差异(p>O.05)。ARHI基因mRNA表达水平与卵巢癌临床分期呈负相关(D0.05)，Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期之间有显著差别(p<0.05)，Ⅲ期与Ⅳ期间有显著差别(p<0.05)。 2、TSA对卵巢癌细胞株生长及ARHI表达的影响 (1)不同浓度TSA(100nmolFL、200nmol/L、300nmol/L、400nmol/L)和顺铂(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、200μmol/L)作用不同时间后对四种细胞均有明显抑制作用，随着浓度时间增加，细胞受抑制程度明显增强(pO.05)。顺铂(cisplatin，CDDP)对四种细胞均有明显的抑制作用，与浓度时间成相关关系(pO.05)。 (2)有效浓度TSA(250nmol/L)和顺铂(80μmol/L)作用48h后存活的卵巢癌细胞A2780、COCl、OC3中ARHI mRNA的表达与未加药的空白对照组没有差别，而SKOV3细胞TSA作用后ARHI的表达量明显高于顺铂对照组和空白对照组。TSA作用后SKOV3细胞系中ARHI mRNA平均表达水平为0.087±0.01，顺铂作用后四种细胞系均没有ARHI表达。 结论： 1、ARHI/NOEY2基因在正常卵巢组织中表达，在卵巢肿瘤组织中有低表达或缺失。 2、ARHI基因在卵巢肿瘤不同组织学分型中表达无差异，但在不同肿瘤分期本文详细研究了低碳钢冷挤压成形的摩擦润滑机理，从理论上分析了磷化-皂化膜的成膜机理、润滑机理以及影响成膜质量的各种因素。同时利用金相显微镜、扫描电镜、电子探针以及X射线衍射仪等试验手段对中温锌系磷化-皂化膜的表面形貌、截面形貌、组织结构及成分进行了实测分析，主要发现： (1)中温锌系磷化膜主要以磷酸锌(H膜)为主，并有少量磷酸锌铁(P膜)存在；磷化膜的表面有棒状和球状两种形貌存在；磷化膜截面是层状结构，各层间间距略有不同；磷化膜层厚度约为20μm。 (2)经过皂化后的磷化膜膜层分为磷酸锌、硬脂酸锌和硬脂酸钠三层。最外层为硬脂酸钠，呈棉絮状结构，次外层为硬脂酸锌，最内层为磷酸锌。 (3)变形后还有残留磷化-皂化膜的部位润滑效果良好。 (4)变形中工件表面各部位磷化-皂化膜层的变形量不同。外侧表面的磷化-皂化膜厚度变薄率从上而下先由小到大，再到小；内侧表面的磷化-皂化膜厚度变薄率从上而下逐渐变大。 (5)变形中各部位材料的变形量不同。上部材料变形量较小，沿高度尺寸向下，材料的变形量逐渐增大，达到工件的中部时(凹模出口部位)，材料的变形量达到最大，随高度尺寸再往下时，材料的变形量又逐渐变小。 (6)成形工件中部(凹模出口部位)摩擦较大，润滑效果不好，极易出现划痕。 实验结果表明低碳钢冷挤压变形过程中采用的中温锌系磷化-皂化膜具有很好的润滑效果。对实验结果分析得出冷挤压变形前后膜层厚度的变化规律以及冷挤压中材料的流动规律，可以指导实际生产中采用合理的工艺磷化-皂化规范，生成最佳的膜层厚度，提高生产效率和原料利用率。

目录

符号说明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

致谢

攻读硕士研究生期间发表文章