卵巢癌细胞与腹膜间皮细胞相互作用对侵袭转移微环境的影响

摘要

第一部分卵巢癌细胞对腹膜间皮细胞(HPMC)Fn及HA表达的影响 目的：探讨卵巢癌细胞对腹膜间皮细胞(HPMC)Fn及HA表达的影响。 方法：采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测卵巢癌细胞SKOV3条件培养液(CM)中转化生长因子-β1(TGF-β1)水平。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA分别检测不同培养条件下HPMC Fn基因表达和细胞裂解液及各上清中Fn蛋白及HA水平。 结果：SKOV3-CM中TGF-β1水平为(236.374±21.82)pg/ml。SKOV3-CM培育HPMC前(空白对照组)，HPMC Fn基因表达为1.334±0.14，细胞裂解液及CM中Fn水平分别为(173.694±16.16)ng/ml及(135.324±11.75)ng/ml，HA表达分别为(17.15±1.43)μg/ml及(7.36±0.82)μg/ml。SKOV3-CM培育HPMC后，HPMCFn基因表达为2.64+0.17，细胞裂解液和CM中Fn水平为(297.694±28.02)ng/ml及(279.584±26.69)ng/ml，HA表达分别为(37.294±3.54)μg/ml及(18.57±1.93)μg/ml，均高于空白对照组(p<0.01)。SKOV3-CM中加入TGF-β1中和抗体培育HPMC后，HPMC Fn基因表达为1.904±0.12，细胞裂解液及CM中Fn水平分别为(231.644±22.18)ng/ml及(212.03±19.54)ng/ml，HA水平分别为(25.53±2.49)μg/ml及(12.164±1.10)μg/ml，均低于SKOV3-CM组(1P<0.01)，但仍高于空白对照组(p<0.05)。 结论：卵巢癌细胞可诱导HPMC表达Fn及HA，分泌TGF-β1是卵巢癌细胞作用HPMC的途径之一。第二部分卵巢癌细胞与HPMC相互作用对癌细胞MMPs及TIMPs表达的影响目的：探讨卵巢癌细胞与HPMC相互作用对癌细胞MMPs及TIMPs表达的影响。 方法：用RT-PCR和ELISA分别检测不同条件下的HPMC-CM对SKOV3MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2基因和蛋白表达的影响。 结果：用无血清培养液培育SKOV3(空白对照组)，SKOV3几乎检测不到MMP-2基因及蛋白的表达，MMP-9基因表达为1.40a±0.04，蛋白水平为(14.54±1.61)ng/ml；TIMP-1及TIMP-2基因表达分别为0.49±0.12，0.63+0.14；蛋白表达分别为(5.73±0.97)ng/ml，(7.22±1.01)ng/ml。用SKOV3-CM培育HPMC前所得的HPMC-CM(HPMC-CM<,1>)培育SKOV3，SKOV3 MMP-2及MMP-9基因表达分别为0.23±0.01，2.66±0.07；蛋白表达分别为(14.97±0.83)ng/ml，(37.19±3.52)ng/ml，均高于空白对照组(P<0.01)；TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表达与空白对照组相比无明显差别(P>0.05)。用SKOV3-CM培育HPMC后所得的HPMC-CM(HPMC-CM<,2>)培育SKOV3，SKOV3 MMP-2及MMP-9基因表达分别为0.47±0.02，4.28±0.09；蛋白表达分别为(39.28±3.55)ng/ml，(62.03±5.34)ng/ml，均高于HPMC-CM<,1>组(P<0.01)；TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表达与HPMC-CM<,1>组相比均无明显差别(P>0.05)。用SKOV3-CM+TGF-β1中和抗体培育HPMC后所得的HPMC-CM(HPMC-CM<,3>)培育SKOV3，SKOV3 MMP-2及MMP-9基因表达分别为0.33±0.02，3.52±0.08；蛋白表达分别为(27.59±1.94)ng/ml，(49.95±4.14)ng/ml，均低于HPMC-CM<,2>组(P<0.05)，但仍高于HPMC-CM<,1>组(P>O.05)；TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表达与HPMC-CM<,2>组及HPMC-CM<,1>组相比均无明显差别(p>0.05)。HPMC-CM<,l>+Fn抗体培育SKOV3后，其MMP-2及MMP-9基因表达分别为0.14±0.01，1.82±0.06；蛋白表达分别为(8.76±0.68)ng/ml，(25.83±2.48)ng/ml，均低于HPMC-CM<,l>组(P<0.01)；TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表达与HPMC-CM<,l>组相比均无明显差别(p>0.05)。HPMC-CM<,l>+HAase培育SKOV3后，其MMP-2及MMP-9基因表达分别为O.16±0.02，1.93±0.15；蛋白表达分别为(9.03±1.17)ng/ml，(26.56±3.42)ng/ml，均低于HPMC-CM<,l.组(P>0.01)；TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表达与HPMC-CM<,l>组相比均无明显差别(P>0.05)。HPMC-CM<,l>+Fn抗体+HAase培育SKOV3后，其MMP-2及MMP-9基因表达分别为0.09±0.01，1.64±0.09；蛋白表达分别为(4.53±0.56)ng/ml，(19.38±2.46)ng/ml，均低于HPMC-CM<,l>+Fn抗体组及HPMC-CM<,l>+HAase组(P均<0.01)：TIMP-1、TIMP-2基因及蛋白表达与HPMC-CM<,l>+Fn抗体组及HPMC-CM<,l>+HAase组相比均无明显差别(P>0.05)。± 结论：卵巢癌细胞作用HPMC后，HPMC诱导癌细胞表达更高的MMP-2及MMP-9，而对癌细胞TIMP-1及TIMP-2的表达无明显影响，分泌TGF-β1是卵巢癌细胞作用HPMC的途径之一。HPMC来源的Fn及HA刺激卵巢癌细胞MMP-2及MMP-9基因和蛋白的表达，而对TIMP-1及TIMP-2的表达无明显影响。

目录

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符号说明

第一部分卵巢癌细胞对腹膜间皮细胞Fn及HA表达的影响

第二部分卵巢癌细胞与HPMC相互作用对癌细胞MMPs及TIMPs表达的影响

第三部分卵巢癌细胞与HPMC相互作用对癌细胞粘附、运动及侵袭的影响

小结

致谢

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