人骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血的实验研究及脑室出血微创治疗的临床研究

摘要

目的：骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中的一种具有跨胚层分化潜能的干细胞。近年来研究发现其可在中枢神经系统内存活并能分化为神经样细胞，在体外也可通过诱导向神经细胞转化，并对脑缺血、脑外伤等疾病的神经功能的缺损有改善作用。其取材方便、体外扩增迅速且能以多种途径移植包括静脉移植、脑内移植。故骨髓间充质干细胞在中枢神经系统损伤修复中的临床应用前景广阔。本研究目的就是探讨人骨髓间充质干细胞的分离和体外培养扩增的方法，通过观察细胞形态、贴壁生长特性、细胞表型等对骨髓间充质干细胞进行鉴定，研究骨髓间充质干细胞的生物学特性。 方法：采集健康成人骨髓血，通过密度梯度离心结合贴壁培养得到较纯化的MSCs，使用含有10﹪胎牛血清的低糖DMEM继续培养扩增MSCs。通过观察细胞形态、贴壁生长特性，使用流式细胞仪检测细胞CD29、CD34、CD45的表达，对培养的MSCs进行鉴定。观察MSCs的细胞形态、生长速度、绘制MSCs的生长曲线。冻存复苏MSCs后观察其存活率和生长状态等。 结果：应用国产淋巴细胞分离液及胎牛血清，通过密度梯度离心结合贴壁培养法可以获得较纯化的MSCs；经原代和传代培养得到扩增，早期生物性状稳定。通过本方法培养的MSCs细胞呈现典型的梭形形状，旋涡状排列、贴壁生长；流式细胞仪检测细胞CD29表达阳性，CD34、CD45表达阴性，符合MSCs的特征。观察细胞生长特性发现，MSCs呈贴壁生长，原代培养9-12d可以达到90﹪融合，传代后的MSCs增殖速度较原代培养明显增快。第3代的MSCs已基本纯化，细胞呈典型的梭形形状，旋涡状排列。随着传代的增加，细胞增殖分化能力减弱。冻存1个月和6个月后复苏的MSCs的生存率分别为90﹪和85﹪，复苏后的细胞生长状态良好。 结论：应用国产淋巴细胞分离液及胎牛血清，通过密度梯度离心结合贴壁培养法可以获得较纯化的MSCs；经原代和传代培养得到扩增，早期生物性状稳定。冻存对MSCs生长特性无明显影响。

目录

原创性声明及关于学位论文使用授权的声明

第一部分人骨髓间充质干细胞的分离、培养、扩增与鉴定

符号说明

前 言

1.材料与方法

结 果

讨 论

结 论

附图表

参考文献

第二部分人骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血的实验研究

符号说明

前 言

材料与方法

结 果

讨论

结 论

附图表

参考文献

第三部分脑室出血微创治疗的临床研究

符号说明

前 言

资料与方法

结 果

讨 论

结 论

附图表

参考文献

致谢

攻读学位期间已发表或待发表的论文

发表论文一

发表论文二