亚麻籽木酚素的分离纯化及其对裸鼠乳腺移植瘤影响的初步研究

摘要

研究目的： 提取亚麻籽木酚素——开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(Secoisolariciresinol diglycoside，SDG)并利用两种不同方法进行分离和纯化，比较不同方法所得产品的产率及纯度；研究SDG对裸鼠乳腺移植瘤的影响。 研究方法： 一、从亚麻籽中提取SDG，利用两种不同的方法(1、硅胶吸附柱层析+硅胶吸附柱层析，2、硅胶吸附柱层析+C18反相柱层析)对SDG提取液分离、纯化，计算SDG产率，高效液相色谱分析确定产品纯度，对两种方法所得产品的产率及纯度对比并分析。 二、选用人乳腺癌细胞株MDA-MB-231对裸鼠进行异种移植；第6周将移植成功的裸鼠随机分为3组：对照组、SDG组和亚麻籽组。每周测量瘤体大小并计算移植瘤表面积，同时记录裸鼠体重、摄食量；第10周处死动物，测量瘤体质量、瘤块大小，记录肿大淋巴结数。取肝脏、肺脏进行病理切片检查。RT-PCR检测各组肿瘤组织中Cyclin D1、p21 mRNA的表达。 结果： 获得SDG纯化产品，方法1、2所得产品产率分别为2.39﹪、1.92﹪；高效液相色谱(high performance liquid chromatographic，HPLC)分析确定产品纯度分别为82.38﹪、87.96﹪；成功建立了人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的裸鼠移植瘤模型；与对照组相比，SDG和亚麻籽组肿瘤表面积、瘤块质量、瘤体积均明显降低(P<0.05)，肿大淋巴结数目有所减少；各组动物体重及摄食量无明显差别，各组肝脏、肺脏均未见明显的肿瘤细胞转移；与BD组相比，SDG组肿瘤组织中p21 mRNA的表达明显升高(P<0.05)，FS组改变不显著；三组肿瘤组织Cvclin D1 mRNA表达差异不显著。结论： 利用两次硅胶吸附柱层析分离纯化的产品，纯度略低于反相柱层析产品，但产率提高0.47﹪，方法1较方法2更适合SDG的规模化生产；SDG可抑制裸鼠MDA-MB-231细胞乳腺移植瘤的生长，SDG使p21 mRNA的表达水平升高是其中一个重要的机制。意义： 近20年来，亚麻籽受到医药界的重视，首先发现它富含ω-3多不饱和脂肪酸，然后发现它含有对人体健康有重要保健作用的木酚素，并且它是木酚素含量最高的食品，因此，美国国家肿瘤研究院(NCI)已把亚麻籽作为6种抗癌植物研究对象之一。ω近年来，以加拿大、澳大利亚、英国和美国为主的西方发达国家，对亚麻籽作为功能食品的研究和开发做了大量的工作，以亚麻籽粉为代表的产品早已面市多年，成为中、老年人的常备保健品。最近，符合疗效性要求的高纯度、标准化木酚素提取物的产品已上市，可以广泛应用于胶囊、压片、谷物早餐和快餐食品的添加剂。此外含有ω-3脂肪酸、可溶性食物纤维和木酚素的营养功能性超浓乳状液和全乳饮料等多种产品也不断出现在市场上。我国在这方面至今仍属空白，因此开展亚麻籽功能性成分的研究和开发工作刻不容缓。 我国有着极为丰富的亚麻籽资源，内蒙、东北、新疆、山西等地产量较大。以亚麻籽为原料进行木酚素SDG等功能性成分的提取并对其药理作用进行研究，这在医学、食品等诸多领域内具有十分积极的意义和巨大价值空间。 乳腺癌已经成为全球女性发病率最高的恶性肿瘤。调查显示，经常食用富含木酚素食品的女性比其他女性患乳腺癌的几率低33﹪，此外多项研究证明亚麻籽木酚素SDG具有抑制肿瘤的作用，但具体作用机制尚不清楚。因此，进一步研究SDG抑制乳腺癌的机制，对于探讨乳腺癌的早期预防和治疗具有重要意义。本研究通过两种方法对SDG进行分离纯化，并对比两种方法所得SDG产品的产率及纯度，为亚麻籽SDG的规模化生产探索更为简单的可行性方案；同时，在动物水平及分子水平上初步探讨了SDG对乳腺癌的抑制作用及可能机制。这些为亚麻籽功能性成分SDG的研究和开发以及乳腺癌有效防治措施的探索等提供了技术对策和理论支持。

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前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

附 表

附 图

参考文献

致 谢

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