PMSF对TOCP诱发OPIDN过程中母鸡神经系统内能量状态变化的影响

摘要

目的 建立磷酸三邻甲苯酯(TOCP)诱导迟发性神经毒性(OPIDN)及受苯甲基磺酰氟(PMSF)保护的动物模型，利用萤光素酶生物发光法(FLB)测定成年罗曼母鸡中枢神经系统(CNS)和周围神经系统(PNS)中三磷酸腺苷(ATP)的含量，利用高效液相色谱法(HPLC)同时测定实验动物CNS和PNS中三种腺苷酸的含量并计算相应的能荷(EC)值。通过研究提前应用PMSF对母鸡在TOCP诱发OPIDN过程中神经系统内能量状态变化的影响，进一步探讨TOCP诱发OPIDN的分子机制。 方法 1.建立TOCP诱发OPIDN及受PMSF保护的的动物模型：成年罗曼母鸡80只，随机分为TOCP组(n=40)及PMSF+TOCP组(n=40)，每组又随机分为染毒后d 0、d 5、d 10、d 15和d 21组(n=8)，其中TOCP组的d 0组为正常对照组。PMSF+TOCP组40只动物，一次sc 60 mg/kg PMSF(溶于DMSO)；20 h后，两个d 0组以外的其它64只实验动物，一次po 750 mg/kg TOCP。在染毒后相应的时间点处理各组动物。 2.观察实验动物OPIDN症状：密切观察实验动物染毒前后一般状况的变化，每隔4 d测量体重，每天观察其OPIDN症状并按8级评分标准进行评价。 3.测定实验动物神经组织中ATP的含量：利用FLB检测实验动物在各时间点大脑、小脑、脊髓、坐骨神经及胫腓神经组织中的ATP含量。 4.测定实验动物神经组织中三种腺苷酸的含量并计算EC值：利用HPLC检测实验动物在各时间点大脑、小脑、脊髓、坐骨神经及胫腓神经组织中的ATP、ADP及AMP含量，并计算相应的EC值以进一步反映神经组织中的能量状态。 结论 1.单独给母鸡染TOCP能够导致动物在表现出明显的OPIDN症状之前，其神经系统的ATP含量及EC值即发生显著的升高，但在本次实验观察终点即当动物完全瘫痪时均有不同程度的降低，且以PNS中降低的幅度为最大。 2.提前给母鸡应用PMSF能够延迟由TOCP诱发的OPIDN症状的出现并减慢其进展，同时能够改变动物染毒后其神经系统内尤其是PNS内ATP含量及EC值的变化程度和变化趋势。 3.单独给母鸡应用：PMSF，可以显著提高动物PNS内的ATP含量及EC值，但受PMSF保护的动物在染TOCPd5其PNS内的ATP含量及EC值即出现显著的降低，且这种低的能量水平一直持续到本次实验观察终点。 4.单独染TOCP所导致的在染毒后d 5母鸡神经系统内ATP含量及EC值所出现的显著性升高可能是其所致OPIDN症状出现的一个重要预示，也可能TOCP诱发OPIDN过程中其它病理变化出现的原因。提前给动物应用PMSF可能正是通过阻止染TOCP后d 5动物PNS内这种能量水平的暂时升高而对动物起到保护作用。

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