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摘要
第一章绪论
1甘油的简介和研究历史
1.1甘油的应用领域
1.2甘油的生物合成
2 1,3-丙二醇的简介和研究历史
2.1 1,3-丙二醇的合成方法及研究进展
2.2 1,3-丙二醇的生物合成
2.3葡萄糖发酵生产1,3-丙二醇的设想
3生物合成中的代谢调控
3.1代谢调控实验技术
3.2论文的目的和意义
第二章实验方法
1实验材料及仪器:
1.1实验材料
1.2培养基
1.3实验溶液
1.4实验仪器
2实验方法
2.1产甘油重组质粒的构建
2.2产1,3-丙二醇重组质粒的构建
2.3利用Red重组技术敲除目的基因
2.4对构建的各种基因工程菌进行发酵
2.5HPLC检测发酵样品
第三章基因工程菌的构建及优化
1葡萄糖到甘油代谢途径的构建
1.1基因工程菌E coliDH5α/pCLG1的构建与检测
1.2基因工程菌E.coliDH5α/pCLG1发酵检测
2甘油到1,3-丙二醇代谢途径的构建
2.1基因工程菌E.coliDH5α/pBMC与E.coliDH5α/pBMD2的构建与检测
2.2基因工程菌E.coliDH5α/pBMC与E.coliDH5α/pBMD2发酵检测
3葡萄糖到1,3-丙二醇代谢途径的构建
4代谢调控
4.1利用cross-over PCR技术构建表达融合蛋白的重组质粒pCLG
4.2基因工程菌E.coliDH5α/pCLG2发酵检测
4.3Red重组技术敲除磷酸丙糖异构酶基因tpiA及甘油激酶基因glp k基因
4.4磷酸丙糖异构酶基因tpi A及甘油激酶基因glp k基因缺陷菌株发酵检测
4.5基因工程菌E.coliDH5α/pBMC与E.coliDH5α/pBMD2摇瓶发酵优化
4.6构建低拷贝重组质粒pCLD
4.7基因工程菌E.coliDH5α/pCLD摇瓶发酵优化
5非诱导型基因工程菌的构建及发酵
5.1构建非诱导型重组质粒pPIG
5.2非诱导型重组菌株E.coliDH5α/pPIG发酵
5.3构建非诱导型质粒pSCD
5.4非诱导型重组菌株E.coliDH5α/pSCD发酵
5.5构建重组大肠杆菌E.coli DH5α(pCLG2/pSCD)与E.coli DH5α(pPIG/pSCD)
5.6重组菌株E.coli DH5α(pCLG2/pSCD)与E.coli DH5α(pPIG/pSCD)发酵
6 小结
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文