正常T细胞表达分泌的活性调节蛋白（RANTES）及其受体（CCR3）在OLP中的表达

摘要

口腔扁平苔藓(oral lichen planus，OLP)，是口腔粘膜病中最常见的疾病之一，部分病损可发生恶变，世界卫生组织(WHO)将其列为可能的癌前状态。OLP的病因至今尚不十分清楚，目前认为是一种T细胞介导的免疫反应，其病程慢性迁延，治疗已成为临床上一个相当棘手的问题，目前还没有治愈OLP的方法。其典型病理特征为上皮不全角化，基底层液化变性，固有层密集的淋巴细胞浸润带。研究发现正常T细胞表达分泌的活性调节蛋白(RANTES)具有诱导活化T细胞、调节炎症的作用，因此推测RANTES在口腔扁平苔藓的发病过程中起着重要作用。 目的： 本实验通过免疫组化及原位杂交技术检测正常口腔粘膜与口腔扁平苔藓组织中RANTES和其受体CCR3蛋白以及RANTES mRNA的表达情况，以观察RANTES及其受体CCR3在口腔扁平苔藓中的变化情况，探讨其在口腔扁平苔藓发生过程中的作用及意义，为临床上治疗口腔扁平苔藓提供新的思路。 方法： 1．收集临床及病理确诊的正常口腔粘膜10例及口腔扁平苔藓粘膜30例，将每个标本的七张连续切片分别进行HE染色、RANTES免疫组化、CCR3免疫组化、RANTES mRNA原位杂交和阴性对照(3张)。根据免疫组化结果从蛋白水平观察RANTES和CCR3在两种组织中的表达情况；根据原位杂交结果从分子水平观察RANTES在两种组织中的表达情况。 2．对免疫组化及原位杂交的结果进行图像分析：切片输入图像分析系统，对表达强度进行半定量分析。每张切片计算5个高倍视野下结缔组织中总阳性淋巴细胞数，并取其均数；同时自切片染色的中心区域上下左右各选择相同面积有代表性的区域，检测平均光密度(optical density，OD)。 3．采用SPSS13.0软件对实验结果进行统计学处理。RANTES、CCR3蛋白、RANTES mRNA阳性细胞数及平均光密度值，结果以均数和标准差(X±s)描述。显著性检验采用单因素方差分析，组间比较采用t检验，P<0.05有统计学意义。 结果： 1、RANTES免疫组化结果：正常口腔粘膜可见上皮棘层、颗粒层以及基底层细胞胞质中RANTES呈弱阳性表达；结缔组织部分淋巴细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞胞质RANTES呈弱阳性表达。口腔扁平苔藓组织可见上皮颗粒层和棘层细胞胞质RANTES呈强阳性表达；结缔组织可见部分淋巴细胞及血管内皮细胞呈中等强度阳性表达。 2、CCR3免疫组化结果：正常口腔粘膜可见CCR3在上皮棘层及基底层细胞呈弱阳性表达，结缔组织散在淋巴细胞呈弱阳性表达。口腔扁平苔藓组织可见CCR3在上皮棘层、颗粒层细胞胞质呈强阳性表达；结缔组织可见大量散在的淋巴细胞呈强阳性表达，血管内皮细胞呈中等强度表达。 3、原位杂交结果：正常口腔粘膜可见基底层上皮细胞及靠近基底层的深层上皮细胞RANTES mRNA呈弱阳性表达，角化层及浅层上皮细胞未见明显表达；结缔组织部分淋巴细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞胞质中RANTES mRNA呈弱阳性表达。口腔扁平苔藓组织可见上皮细胞基底层及颗粒层、棘层细胞胞质及核膜RANTES mRNA呈中等强度阳性表达；结缔组织部分淋巴细胞及部分血管内皮细胞胞质中RANTES mRNA呈中等强度阳性表达。 4、平均光密度检测：口腔扁平苔藓组织的RANTES、CCR3及RANTES mRNA平均光密度比正常口腔粘膜平均光密度增大，组间比较有显著性差异(P<0.05)。 结论： 研究发现口腔扁平苔藓组织中RANTES及其受体CCR3表达较正常口腔粘膜增多，且其分布存在差异，提示RANTES及其受体CCR3在口腔扁平苔藓的发生过程中可能发挥一定作用，为临床上治疗口腔扁平苔藓提供新的思路。

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讨论

结论

附图

参考文献

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