论文说明:符号说明
声明
摘要
第一部分前言
1.真核启动子的概念,结构及分类
1.1启动子的概念
1.2真核启动子的结构模型
1.3启动子的分类
1.4启动子克隆的方法
1.5本课题研究的目的意义
第二部分材料与方法
2.1实验材料
2.1.1植物材料
2.2植物表达载体的构建
2.2.1材料
2.2.2质粒的重组和转化
2.2.3 DY缺失突变体和HyPRP缺失突变植物表达载体的构建
2.3转基因烟草的获得
2.3.1重组质粒转化根癌农杆菌
2.3.2根癌农杆菌转化烟草
2.3.3转基因烟草的PCR和Southern检测
2.4转基因烟草GUS酶活测定及组织化学检测
2.4.1转基因烟草GUS组织化学检测
2.4.2转基因烟草GUS酶活测定
2.5草莓DY基因表达模式的RT-PCR分析
2.5.1草莓各组织总RNA的提取
2.5.2反转录体系
2.5.3 Real-time RT-PCR
第三部分结果与分析
3.1 DY基因的的表达模式
3.2 DY和HyPRP基因调控序列的扩增
3.2.1 DY基因调控序列的扩增
3.2.2 HyPRP基因启动子片段的扩增
3.3草莓DY基因上游和HyPRP基因启动子序列的生物信息学分析
3.3.1草莓DY基因上游序列生物信息学分析
3.3.2草莓HyPRP基因启动子序列生物信息学分析
3.4启动子系列缺失突变体:GUS植物表达载体的构建
3.4.1 DY基因启动子系列缺失突变体:GUS植物表达载体的构建
3.4.2 HyPRP基因启动子系列缺失突变体:GUS植物表达载体的构建
3.5转基因烟草的分子生物学检测
3.5.1转基因烟草的PCR检测
3.5.2转基因烟草的Sourthern blotting分析
3.6烟草果实(子房)的发育过程
3.7转基因烟草GUS基因表达的组织化学检测
3.8转基因烟草果实(子房)GUS酶活测定
3.8.1转基因烟草果实(子房)各发育时期的GUS酶活测定
3.8.2 PH和PD系列转基因株系间转基因烟草果实(子房)的GUS平均酶活性测定
第四部分讨论
4.1 DY基因启动子是一个果实特异表达的启动子
4.2 HyPRP基因启动子是一个果实特异表达的启动子
4.3 TAIL-PCR方法在启动子克隆上的应用
参考文献
致谢