格林-巴利综合征患者脑脊液差异蛋白质组学研究

摘要

格林-巴利综合征(Guillain-Barre’Syndrome，GBS)又称急性炎性脱髓鞘性多神经病(acute Inflammatory demyelinating polyneuropathy，AIDP)，是累及周围神经(peripheral nervous system)和神经根髓鞘的，以急性、对称地进行性、获得性、炎性为特征的自身免疫性疾病。其病理特征为周围神经血管周围的淋巴细胞和巨噬细胞的浸润，为炎症伴髓鞘脱失即炎性脱髓鞘。是目前急性软瘫的最常见病因。在发展中国家发病率比较高，多为急性发病，预后较差。即使得到加强监护，仍然有3％-7％的死亡率，此外，大约7％-15％的病人会留有神经学上的后遗症，如：面瘫、下肢无力伴垂足、手无力和肌萎缩、植物神经障碍等。 GBS的广泛被接受的诊断标准仍然是描述性的，尚缺乏明确的定义和确切的诊断标志物，其病因和免疫学发病机制迄今未明。大量的实验证明，GBS患者脑脊液(cerebrospinal fluid CSF)中存在蛋白质的异常表达，这为我们研究GBS提供了一个独特的窗口。到目前为止，国内对GBS脑脊液的研究尚缺乏系统的研究，多停留在经典实验生物学研究水平。本研究将蛋白质组学技术体系应用于GBS脑脊液的研究，通过优化双向电泳分离技术、质谱鉴定技术、搜索大量数据库，检测到GBS患者与正常人脑脊液的差异蛋白，并对某些明显的差异蛋白进行后期的免疫学验证，为疾病的早期诊断、有效药物靶点的发现、疾病发病机制的探讨提供实验和理论依据。 目的：建立GBS患者与正常人脑脊液比较蛋白质组学的技术研究体系，寻找并鉴定GBS患者脑脊液特异蛋白，为其发病机制提供线索，为临床诊断和治疗提供依据。 方法：分别取GBS疾病组和对照组的新鲜脑脊液，冰丙酮沉淀法提取总蛋白，进行第一向等电聚焦电泳(IEF)和第二向十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质组，ImageMaster 2D图像分析软件对分析胶进行比较分析，识别差异表达明显的蛋白质点。抠取制备胶上相应的蛋白质点，应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI/TOF/MS)得到肽质量指纹图谱(PMF)，搜索SWISSPROT数据库鉴定蛋白质点。随后对感兴趣的蛋白质点行酶联免疫吸附实验(ELISA)进行免疫学验证。 结果：分别获得GBS患者及正常对照组脑脊液蛋白质组表达图谱，识别出387±29(实验组)和398±36(对照组)个蛋白质点。GBS患者和对照组脑脊液的双向电泳图谱存在明显差异，通过统计学分析，10个蛋白质点在两组间存在显著差异，其中4个蛋白质点在GBS疾病组中表达明显上调，6个降低。其中Cystatin C表达下调，是改变最明显的蛋白质点，为本实验首次发现。随后的ELISA也证实GBS患者的脑脊液中Cystatin C的浓度明显低于对照组。 结论：本研究成功建立了应用双向电泳及生物质谱方法研究GBS患者脑脊液蛋白质组学的技术体系。识别并鉴定了10个与格林-巴利综合征疾病有关的特异蛋白点，并在免疫学角度验证了Cystatin C表达下调。这些蛋白质与GBS的确切关系有待进一步探讨。

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摘要

前言

第一部分 格林-巴利综合征患者脑脊液蛋白质组学技术体系的建立

实验材料和方法

结果

讨论

第二部分 格林-巴利综合征患者脑脊液的差异蛋白质组学研究

实验材料和方法

结果

讨论

参考文献

致谢

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