E1A激活基因阻遏子抑制大鼠视网膜光损伤感光细胞凋亡及其机制的研究

摘要

目的：
　　研究CREG蛋白对抗大鼠视网膜感光细胞光损害的作用，客观评价其抗凋亡的能力，探索CREG在感光细胞光损伤中的抗凋亡机制。
　　方法：
　　1、造模：选取健康wistar大鼠30只,雌雄不限,将其随机分成3组，对照组、光照1周组和光照2周组，每组10只。对3组大鼠鼠眼的冰冻切片行HE染色，确立模型为光照一周组。
　　2、提取光照1周组和对照组大鼠视网膜蛋白，为检测感光细胞凋亡的途径，用Western blot检测MAPK信号通路中关键蛋白ERK、P38、JNK及其磷酸化的表达量。
　　3、选取30只wistar大鼠随机分成3组，制备光损伤模型，制备完毕后将4μlCREG蛋白和4μlPBS分别注入大鼠的左右眼玻璃体腔。注射后第1天、3天、7天摘取鼠眼，行冰冻切片及HE染色，提取大鼠视网膜蛋白，Western blot检测大鼠视网膜蛋白中凋亡因子casepase3、8、9的表达量。
　　4、Western blot检测MAPK凋亡通路及PI3K/AKT通路中关键蛋白P38、JNK、AKT及它们的磷酸化形式的表达量。将P38抑制剂SB203580，JNK抑制剂SP600125，AKT抑制剂LY2940002对3天组大鼠注射CREG蛋白眼进行玻璃体腔注射，剂量为4μl，对照组注射同等剂量的PBS。Western blot检测两组中Caspase3的表达情况。
　　结果：
　　1、光照1周组视网膜外核层细胞较对照组变薄，光照2周视网膜外核层细胞消失。
　　2、光照1周组的大鼠视网膜蛋白中p-P38、p-JNK的表达量较对照组的明显增加（P<0.001），P38、JNK、ERK、p-ERK的表达量较对照组无明显变化。
　　3、CREG蛋白注射3天组较对照组视网膜外核层细胞凋亡减少，而1天组和7天组无明显变化。
　　4、CREG蛋白注射3天组大鼠的p-JNK、p-P38、较对照组明显减少（P<0.001），p-AKT表达量明显增加（P<0.001）。而1天组和7天组较对照组无明显变化。
　　5、P38、JNK、AKT抑制剂注射组中的Caspase3的表达量较对照组明显增加（P<0.001）。
　　结论：
　　1、视网膜光损伤感光细胞的凋亡可以通过MAPK信号通路中关键蛋白P38和JNK介导。
　　2、CREG蛋白注射大鼠玻璃体腔后3天组能够抑制光损伤感光细胞的凋亡。
　　3、CREG可以通过调节MAPK及PI3K/AKT信号通路，进而抑制光损伤细胞的凋亡。

目录

缩 略 语 表

1 引言

2 实验材料

2.1 实验动物

2.2 药物及试剂

2.3主要仪器

3.1 建立大鼠视网膜光损伤模型

3.2 分组与给药

3.4 HE染色

3.5 Western blot 检测

3.6 P38、JNK、AKT抑制剂玻璃体腔注射后Western blot检测各组Caspase3的表达量

3.7 数据处理与分析

4.1 光损伤模型的建立

4.2 MAPK凋亡通路中的关键蛋白ERK、JNK、P38、p-ERK、p-JNK、p-P38的表达量

4.3 注药后大鼠视网膜HE染色情况

4.4注药后大鼠视网膜中Caspase3、8、9表达情况

4.5 CREG蛋白抑制视网膜细胞感光细胞凋亡的机制

5 讨论

5.1 大鼠视网膜光损伤模型的建立

5.2 大鼠视网膜光损伤细胞凋亡的机制

5.3 CREG蛋白抑制大鼠视网膜光损伤细胞凋亡

5.4 CREG蛋白抑制大鼠视网膜光损伤细胞凋亡的机制

6 结论

参考文献

综述:E1A激活基因阻遏子抑制凋亡的研究进展

致谢

作 者 简 介

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