顺铂联合加热对肝癌患者术中自体回收血液中癌细胞的杀灭作用及对红细胞的影响

摘要

术中回收式自体输血(intraoperative blood salvage，IBS)，即将术中出血回收后，进行过滤、离心、清洗、浓缩，得到浓缩红细胞，再回输给患者的临床方法。IBS用于非恶性肿瘤手术能成功地减少异体输血，有效地节约了许多手术过程中的用血，成为了为临床工作中的安全用血和节约用血的重要措施。自体血回输技术对于肿瘤手术患者一度的研究认为，自体血回输技术有引起肿瘤细胞血行播散的可能而一直被认为是自体输血的禁忌证。但近期的许多回顾性研究表明，术中回收性自体输血并不一定增加患者术后的肿瘤转移发生率。顺铂是临床常用的抗肿瘤药物，是细胞周期非特异性药物，主要作用于肿瘤细胞的DNA，发挥抗肿瘤作用。顺铂是最早发现的与热疗有协同作用的化疗药物之一，顺铂联合热处理可以明显增强其对肿瘤细胞的杀伤作用。本研究在体外将肿瘤细胞和浓缩红细胞的混悬液分别进行不同浓度的顺铂联合热处理，观察顺铂联合热处理对肿瘤细胞的杀伤作用及对红细胞形态学和功能学的影响，探讨加热与化疗药结合处理用于恶性肿瘤患者术中自体血液回输的安全性。
　　 目的：探讨顺铂联合加热处理对肝癌患者术中自体回收血中肿瘤细胞的杀灭作用及对红细胞的影响。
　　 方法：将肝癌细胞加入红细胞悬液中，同时采用顺铂和加热处理。根据顺铂浓度和温度分为8组：37℃空白对照组(A组)、37℃DDP浓度50μg/ml组(B组)、37℃DDP浓度100μg/ml组(C组)、37℃DDP浓度200μg/ml组(D组)、42℃DDP浓度0μg/ml组(E组)、42℃DDP浓度50μg/ml组(F组)、42℃DDP浓度100μg/ml组(G组)、42℃DDP浓度200μg/ml组(H组)，处理时间均为30min。采用密度梯度离心法将处理后的肝癌细胞和红细胞分离后，测定肿瘤细胞抑制率及克隆生成率，测定红细胞渗透脆性、2，3-DPG含量及红细胞膜Na+-K+ATP酶活性。
　　 结果：随着温度和顺铂浓度的升高，肿瘤细胞的抑制率呈上升趋势。H组肿瘤细胞抑制率>99％。与A组比较，其余各组肿瘤细胞的克隆生成率明显降低(P<0.01)，且H组未出现克隆生成。处理后H组红细胞渗透脆性略有改变，但在0.68％的氯化钠溶液中的溶血率<1％。处理后A组和H组红细胞的2，3-DPG含量及红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性与处理前无统计学差异(P>0.05)。
　　 结论：1、顺铂联合加热处理对肝癌细胞株均有明显的抑制作用，加热可以提高细胞对顺铂的敏感性，增强顺铂的杀伤作用；顺铂浓度为200μg/ml并联合42℃加温处理30min后，肿瘤细胞均失去增殖能力。2、顺铂热处理后各组红细胞形态未见明显改变，红细胞渗透脆性无显著改变，处理组红细胞的2，3-DPG含量与对照组比较无统计学意义，红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性与对照组比较，各组降低均不明显(P>0.05)。顺铂200μg/ml联合42℃加温处理30min对红细胞形态及功能无明显影响。