哮喘及COPD病人气道巨噬细胞吞噬功能及相关基因表达

摘要

目的：初步测定慢性阻塞性肺疾病患者及哮喘患者的气道巨噬细胞吞噬功能变化及其与吞噬功能相关基因表达。
　　 1.材料方法：
　　 1.1样本来源:20例慢性阻塞性肺疾病患者、20例支气管哮喘患者均为2010年10月至2011年3月在本院门诊就诊患者,20例健康志愿者为医学院学生、医务人员及住院病人家属。入选标准:慢性阻塞性肺疾病患者为处于稳定期的患者,支气管哮喘病人为处于非急性发作期患者以及轻中度哮喘急性发作患者,健康志愿者为最近半年内健康查体无异常发现者。排除标准:合并肺部其他疾病及其他系统疾病者。与每位受试者签订临床试验知情同意书。分为三组:见下表:
　　 1.2方法与步骤
　　 1.2.1.诱导痰法取得痰液。将痰液称重(g),加入4倍痰液体积的0.1％DTT(二硫苏糖醇),于37℃水浴锅中震荡摇匀15-30min,直到痰中粘液溶解。300目钢网(孔径48微米)过滤已溶解痰液,除去不溶物,将痰液转移至60mL离心管中1500rpm离心5min,取沉淀物,适量PBS洗涤1-2次。
　　 1.2.2分离巨噬细胞。向细胞沉淀加入1mL含20％小牛血清RPMI-1640液(含100 U/mL penicillin,and100μg/mL streptomycin)重悬细胞,置于二氧化碳细胞培养箱(5％C02,37℃)内培养2h,弃上清。用PBS缓慢冲洗细胞2次(轻轻吹打,避免洗去贴壁细胞),去除未贴壁细胞。重新加入20％小牛血清RPMI-1640液(含100 U/mLpenicillin,and100μg/mL streptomycin),置二氧化碳细胞培养箱内备用。每两到三天更换培养液。
　　 1.2.3.进行吞噬功能检验,比较各组吞噬荧光标记金葡菌的吞噬指数(PI).
　　 1.2.4.实时定量反转录PCR法测定各组吞噬相关基因的表达(转录水平).
　　 2.结果：
　　 2.1对照组、哮喘组、COPD组的巨噬细胞吞噬指数(PI)分别为85±9％、73±10％、78±7％,哮喘组和COPD组与对照组相比,气道巨噬细胞的吞噬功能均受抑制(p＜0.05),其中,哮喘组较COPD组气道巨噬细胞的吞噬功能受抑制更明显(p＜0.05).
　　 2.2 SR-A1、MACRO、TLR2在对照组、哮喘组和COPD组的表达(转录水平)无明显差别(p＞0.05),与对照组相比,TLR4在哮喘组的表达(转录水平)下调(p＜0.05),而在COPD组表达(转录水平)上调(p＜0.05)。
　　 3.结论：
　　 哮喘和COPD病人气道巨噬细胞的吞噬功能下降,哮喘病人气道巨噬细胞的吞噬功能(PI=73±10％,p＜0.05)较COPD组病人的气道巨噬细胞的吞噬功能(PI=78±7％,p＜0.05)下降更明显。SR-A1、MACRO、TLR2在对照组、哮喘组和COPD组的表达(转录水平)无明显差别,TLR4在哮喘组表达下调,而在COPD组表达上调。