PARP-1抑制剂对卵巢癌耐药细胞C13*生长活性及耐药性的影响

摘要

背景和目的
　　 卵巢癌是女性生殖系统中病死率最高的恶性肿瘤，其发病率呈缓慢上升的趋势[1]。绝大部分患者缺乏早期症状、就诊时70％已为晚期，并伴有腹盆腔的广泛转移。晚期卵巢癌的主要治疗方式为理想的肿瘤细胞减灭术加以铂类为主的辅助化疗[2]。然而顺铂作为最常用的一线化疗药物，对其产生原发或继发耐药性是卵巢癌治疗的主要障碍，也是晚期卵巢癌患者五年生存率几乎难以超过30％的主要原因之一[3]。
　　 目前关于卵巢癌的顺铂耐药机制的研究成为肿瘤治疗的难点与热点。顺铂是细胞周期非特性抗肿瘤药物[4，5]，细胞毒作用主要是形成铂-DNA加合物，从而破坏DNA的结构和复制功能，导致DNA断裂和编码错误[6]。DNA修复是细胞遗传基础稳定性的关键，DNA修复能力增强是导致肿瘤细胞耐药的主要原因[7,8]，并发现聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1[Poly(ADP-ribose)polymerase-1，PARP-1]在DNA损伤修复发挥重要作用。PARP-1是存在于哺乳动物中的翻译后修饰酶，在保持染色体结构完整、参与DNA复制和转录、维持基因组稳定和细胞凋亡过程中发挥着关键作用[9,10]。PARP-1在细胞中以非活性形式大量存在，辐射、化疗药物等导致DNA损伤后，DNA链的缺口或游离的DNA末端将其激活，PARP-1检测到DNA断链末端并与之结合后，将参与DNA损伤修复的蛋白迅速募集到损伤位点，一方面对DNA断链予以修复，另一方面保护裸露的DNA末端免遭核酸酶的降解[11,12]。
　　 本研究欲通过选用不同浓度新型高效PARP抑制剂PJ34处理卵巢癌顺铂耐药细胞株C13*，探讨该药物对C13*细胞生长活性及对顺铂敏感性的影响，为PARP-1抑制剂的临床应用提供理论指导。
　　 方法
　　 1、应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测PJ34对C13*细胞增殖活性及顺铂敏感性的影响;
　　 2、采用流式细胞术检测PJ34对C13*细胞凋亡和细胞周期的影响;
　　 3、免疫荧光技术及蛋白印迹法(Westernblot)检测PJ34处理前后PARP-1的表达及定位情况。
　　 结果
　　 1.PJ34对C13*细胞增殖及耐药的影响MTT结果显示当顺铂浓度不变时，随着PJ34浓度的增加，C13*细胞增殖抑制率明显增强(P＜0.05)，PJ34浓度固定时，随着顺铂浓度的增加，C13*细胞增殖抑制率明显增强(P＜0.05)。
　　 2.PJ34对C13*细胞凋亡率及周期的影响细胞凋亡率随PJ34浓度的增加而增高(P＜0.05);周期为PJ34浓度越高，G0/G1期细胞越多，S期细胞越少。
　　 3.PJ34对C13*细胞内PARP-1蛋白的表达及其定位的影响免疫荧光化学结果显示PARP-1蛋白主要位于细胞核内，少部分位于细胞浆中，当PJ34作用细胞后，细胞内蛋白表达明显减少。
　　 4.PARP-1蛋白的表达C13*细胞经0，1，5μmmol/LPJ34及顺铂2.5μg/mL+PJ345μmmol/L处理24小时后，PARP-1蛋白表达量分别为0.98±0.03，0.78士0.01，0.43士0.04和0.12+0.01，C13*细胞中PARP-1蛋白表达随PJ34浓度增高而降低(P＜0.05)，当顺铂与PJ34共同作用后C13*细胞中PARP-1蛋白表达降低更加明显（P＜0.01）。
　　 结论
　　 1、PJ34可抑制C13*细胞增殖，能够明显增强顺铂对C13*细胞的化学毒性，提高其对顺铂的敏感性。
　　 2、PJ34能促进C13*细胞凋亡，细胞凋亡率随PJ34浓度的增加而增高;周期为PJ34浓度越高，G0/G1期细胞越多，S期细胞越少。
　　 3、WesternBlotting及免疫荧光化学结果显示，不同浓度PJ34处理后，卵巢癌耐药株C13*细胞中PARP-1蛋白表达量随药物浓度的增加而明显下降，提示卵巢上皮性细胞癌耐药与细胞内PARP-1蛋白过度表达有关。

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前言

材料和方法

结果

讨论

结论

附表

附图

参考文献

综述

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