肝细胞生长因子基因转染遏制高动力性肺动脉高压形成的实验研究

摘要

目的:以携带肝细胞生长因子HGF基因以及携带绿色荧光蛋白GFP的重组腺病毒载体为原料，将病毒载体进一步扩增，并对Ad-HGF进行鉴定、纯化和滴度测定及安全性检测。 方法:使用Ad-HGF和Ad-GFP，在人胚肾293细胞中进行扩增，对Ad-HGF的DNA进行PCR检测;氯化铯密度梯度离心法纯化病毒，紫外分光光度仪测定病毒颗粒数及纯度，噬斑分析法、快速CPE分析测定病毒感染滴度(pfu/ml)，采用敏感细胞病变法检测有复制能力的腺病毒。 结果:筛选扩增完成含有目的基因的Ad-HGF，PCR法证明Ad-HGF中稳定地整合有HGF的基因，RT-PCR方法检测出病毒反应阳性293细胞中的Ad-HGF特异性mRNA，结果表明这些基因可被有效地转录。在293细胞中筛选、扩增出Ad-HGF，得到的Ad-HGF滴度为1.1×109pfu/ml。经氯化铯密度梯度离心后的滴度达到2.0×1012pfu/ml。制备的Ad-HGF感染A549细胞未检测到有复制能力的腺病毒存在，说明此法制备的重组腺病毒Ad-HGF有良好的使用安全性。 结论:携带HGF基因的重组腺病毒Ad-HGF，可在293细胞中扩增出安全、高滴度的病毒颗粒，为研究动力性肺高压血管新生基因治疗奠定了基础。

目录

声明

第一部分 肝细胞生长因子基因重组腺病毒载体(Ad-HGF)的扩增及鉴定

摘要

前言

材料

方法

结果

讨论

第二部分 Ad-HGF体外转染人脐静脉内皮细胞促其增殖、分化的实验研究

摘要

前言

材料

方法

结果

讨论

结论

第三部分 颈内静脉-颈总动脉端侧吻合制作兔的动力型肺动脉高压模型

摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

第四部分 HGF基因转染遏制兔高动力性肺动脉高压形成的实验研究

摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

主要英文缩略词表

附图表

参考文献

致谢

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