反向固相多肽合成方法的改进与应用

摘要

多肽是由α-氨基酸依次相连而形成的化合物，活性肽广泛分布于生物界中，起着各种各样的调节作用。其中多肽C-端衍生物能够提高耐酶解能力，增强稳定性，具有极高的研究价值与应用前景。自1963年Merrifield采用固相合成多肽以来，C→N方向合成多肽的方法已经比较完善。但是，很少有研究尝试进行反向N→C合成多肽。反向合成具有直接合成多肽C-端（酰胺、酯类、酮类、醛类）衍生物的巨大优势。
　　 本文通过将转移活化酯缩合(TAEC)技术与Fmoc固相多肽化学合成方法(Fmoc-SPPS)有效结合，对实验中各种反应条件进行探索、比较和优化，建立了反向固相多肽化学合成(ISPPS)新方法。应用所建立的新方法合成了5个三肽C-端衍生物及片段缩合合成十二肽，验证了该方法既保留了传统TAEC技术与Fmoc-SPPS的优势，又可以有效弥补正向固相多肽合成方法(SPPS)难以直接合成多肽C-端衍生物的弱点。新方法在进一步开展多肽C-端衍生物合成和C-端片段缩合方面展示出了良好的应用前景。
　　 本文开展的研究工作主要包括以下四个方面:(1)研制满足TAEC技术及Fmoc-SPPS方法需求的系列新型氨基酸酰肼衍生物作为ISPPS的构件;(2)合理设计Linker，并将其连接于树脂上;(3)将转移活化酯缩合技术与Fmoc-SPPS有效结合，建立ISPPS新方法并应用于合成不同类型的多肽C-端衍生物;(4)优化实验中的反应条件，提高目标多肽C-端衍生物的收率与纯度。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 引言

1．1 多肽简介

1．2 多肽化学合成

1．2．1 多肽化学合成的基本原理

1．2．2 多肽化学合成的分类

1．2．3 固相多肽合成(Solid-Phase Peptide Synthesis，SPPS)

1．2．4 ISPPS方法研究进展

1．3 转移活化酯技术(Transfer Active Ester Condensation，TAEC)

1．4 本论文的研究目的和内容

1．4．1 本论文的研究目的

1．4．2 本论文的研究内容

第二章 氨基酸Fmoc酰肼构件的合成

2．1 实验仪器与试剂

2．1．1 实验仪器

2．1．2 实验试剂

2．2 检测方法

2．2．1 产物的TLC和HPLC检测

2．2．2 MS检测

2．3 实验内容

2．3．1 Boc-AA-OH衍生物的化学合成

2．3．2 Fmoc-NHNH2的合成

2．3．3 Boc-AA-NH-NH-Fmoc衍生物的化学合成

2．3．4 H-AA-NH-NH-Fmoc衍生物的化学合成

2．3．5 含未保护侧链H-Ser-NH-NH-Fmoc·TFA的合成

2．4 结果与讨论

2．4．1 临时性保护基的选择

2．4．2 缩合试剂的选择

2．4．3 合成路线的选择

2．5 本章结论

第三章 功能树脂与Linker相连及封闭

3．1 实验仪器与试剂

3．2 实验内容

3．2．1 方案一

3．2．2 方案二

3．2．3 树脂未反应位点的封闭

3．3 结果与讨论

3．4 本章结论

第四章 反向固相多肽C-端衍生物的合成

4．1 实验仪器与试剂

4．2 检测方法

4．2．1 产物的HPLC检查

4．2．2 MS检测

4．3 实验内容

4．3．1 三肽C-端衍生物的合成

4．3．2 片段缩合合成十二肽

4．4 结果与讨论

4．5 本章结论

第五章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

附录

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表论文情况