1.不同数量和不同分化阶段骨髓间充质干细胞对兔VX2膀胱肿瘤间质重构的影响；2.甲状腺滤泡癌样肾细胞癌的临床特征分析

摘要

本文分为两个部分进行探讨：
　　第一部分 不同数量和不同分化阶段骨髓间充质干细胞对兔VX2膀胱肿瘤间质重构的影响
　　目的：
　　1.研究不同数量和分化阶段MSCs对VX2膀胱肿瘤生长、侵袭的影响
　　2.探讨MSCs对影响肿瘤间质重构的某些生长因子和基质金属蛋白酶表达的影响，从而对MSCs促进肿瘤生长的潜在机制进行探讨。
　　方法：
　　1.动物分组:新西兰大白兔（雄性1.5-2.0kg，8周龄），共70只，随机分为7组(n=10)。实验第一部分包括三组动物A，B，C;实验第二部分包括四组动物D，E，F,G。
　　2.分离兔骨髓间充质干细胞、体外扩增和特性鉴定:对每只新西兰大白兔均行双侧髂骨处多点穿刺抽取骨髓MSCs骨髓，采用密度梯度离心法分离MSCs,贴壁培养法对MSCs进行体外扩增，运用形态学观察细胞形态、流式细胞仪检测培养的MSCs的表面抗原，从而对MSCs进行鉴定。
　　3.建立兔VX2膀胱肿瘤模型，监测肿瘤生长及转移:MSCs体外扩增成功后，从荷瘤兔摘取VX2肿瘤组织并制备VX2肿瘤细胞悬液，将VX2肿瘤细胞细胞悬液和自体骨髓MSCs细胞悬液混合，配制总体积为300μl间质为PBS的混合悬液，对所有动物麻醉后行自体膀胱粘膜下接种。
　　第一部分 对A，B，C三组动物于第七，十四，二十一，二十八天行膀胱超声检查，记录肿瘤的长短直径，从而建立肿瘤的生长曲线图，对各组动物肿瘤生长速度进行比较，至第四周处死这三组动物，取出肿瘤标本备用，记录各组的远处转移。
　　第二部分 对D，E，F,G四组动物按顺序分别于第七，十四，二十一，二十八天处死，取出膀胱肿瘤标本用于下一步检测。
　　4.蛋白水平:运用免疫组织化学法对各组肿瘤标本组织中的特定生长因子和基质金属蛋白酶的表达进行测定:包括生长因子（TGFβ1、bFGF、HGF）和基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)，利用Image Pro Plus软件计算平均积分光密度(intergrated optical density, IOD)，半定量分析各组免疫组化的表达强度。从而证实MSCs对肿瘤组织内生长因子和MMPs蛋白水平表达的影响。
　　5.mRNA水平:运用Real-time PCR技术检测特定生长因子和基质重构蛋白酶mRNA表达水平:利用SYBR GreenⅠ法测定上述各组肿瘤组织相关生长因子和基质金属蛋白酶，采用2-△Ct△Ct法进行相关的数据分析。
　　结果：
　　1.MSCs鉴定:形态学观察体外培养的MSCs形态呈均匀的长梭形，生长曲线大致呈S形，经流式细胞检测鉴定为兔MSCs。
　　2.A、B、C三组实验动物MSCs对膀胱VX2肿瘤的影响作用。
　　3.对A、B、C三组肿瘤标本中特定生长因子和基质金属蛋白酶免疫组化分析:B组三种生长因子TGFβ1、bFGF、HGF IOD值（15498.25±3895.28、9158.81±3862.01、13524.98±4012.67）大于A组IOD值（8865.37±2359.05、5492.18±1936.20、8163.58±3863.37），P＜0.05;C组三种生长因子（顺序同上）免疫组化IOD值分别是21593.99±6518.68、14367.07±4169.57、15681.24±3646.28，均显著高于A组，P值＜0.05，其中的TGFβ1、bFGF表达高于B组IOD值，差异有统计学意义(P＜0.05);基质金属蛋白酶:基质金属蛋白酶-2(MMP2)在A、B、C三组免疫组化测定值分别为26895.31±8064.22、53047.69±16244.23、64899.31±18443.20，其中B、C两组均大于A组，差异有统计学意义，B、C两组之间无差异(P=0.231);基质会属蛋白酶-9(MMP9)在A、B、C三组免疫组化测定值分别为35881.22±5127.41、62441.90±21360.28、92688.26±29548.31，其中B、C两组均大于A组，差异有统计学意义，并且C组于统计学上高于B组（P=0.022）。
　　4.对D、E、F、G四组肿瘤标本中特定生长因子和基质金属蛋白酶免疫组化分析:第四周处死组（G组）TGFβ1、bFGF、HGF免疫组化IOD值最高（依次为15396.10±3230.57、9280.66±3754.99、13203.17±3990.86）;第三周处死组(F组)TGFβ1、bFGF、HGF免疫组化IOD值分别为14119.12±4013.33、8977.31±3011.45、11378.24±4136.92;第二周处死组（E组）TGFβ1、bFGF、HGF免疫组化IOD值分别为9979.87±3473.33、8017.04±2989.68、7794.83±3277.94;第一周处死组(D组)TGFβ1、bFGF、HGF免疫组化IOD值分别为9076.22±2997.57、8231.96±3011.28、7686.51±2768.94。四组生长因子总体呈现随时间增长逐渐增加的趋势，但TGFβ1 G组显著高于E、D组，F组显著高于E、D组;bFGF四组均无显著差异;HGF G组显著高于E、D组，F组显著高于E、D组。基质金属蛋白酶:主要表达于间质细胞包括炎性细胞、内皮细胞、成纤维细胞和肿瘤细胞的胞膜以及胞浆，肿瘤浸润活跃部分阳性表达尤其高。MMP2免疫组化IOD值在D、E、F、G四组依次为21487.41±6012.72、20985.56±6988.59、37766.64±9971.2251507.50±17679.55，依次升高，G组与E、F、D组相比有显著差异，F组与E、D组相比明显增高;MMP9的免疫组化的表达在D、E、F、G四组依次为33651.39±6772.44、35998.87±7969.57、49978.67±11532.48、60582.28±22975.45，G组显著高于D、E组，F组显著高于D组。
　　5.对A、B、C三组肿瘤标本中特定生长因子和基质金属蛋白酶mRNA水平的检测:生长因子:B组三种生长因子TGFβ1、bFGF、HGF mRNA表达水平按顺序依次为3.429±0.607、2.943±0.518、2.235±0.590，显著高于A组的表达水平（1.105±0.172、1.233±0.169、1.169±0.237），P值＜0.05;C组三种细胞因子mRNA表达依次为3.719±0.655、3.828±0.681、3.247±0.509，均高于A组，P值＜0.05，同时C组中的bFGF、HGF两种细胞因子mRNA表达高于B组，P值＜0.05。基质金属蛋白酶: A、B、C三组标本的MMP9的mRNA表达水平分别为0.960±0.158、3.592±0.629、4.269±1.245，按顺序升高，各组之间均有统计学差异，P值＜0.05;A、B、C三组标本的MMP2 mRNA表达水平分别为1.248±0.278、3.813±0.967、4.089±1.097，B、C两组均高于A组，有统计学差异(P＜0.05)，B、C两组之间没有统计学差异。
　　结论：
　　1.运用VX2肿瘤细胞悬液接种于膀胱粘膜下建立膀胱肿瘤模型，效果确切，能够可控性监测膀胱肿瘤的发生发展进程。
　　2.不同数量的MSCs能够促进膀胱VX2肿瘤的生长以及局部侵袭进程。
　　3.不同数量以及不同分化阶段的MSCs能够诱导肿瘤组织表达某些特定的生长因子，从而作用于肿瘤间质重构，并有可能通过这一进程促进肿瘤的生长。
　　4.不同数量以及不同分化阶段的MSCs能够提高肿瘤组织基质蛋白酶(MMPs)的表达水平，影响肿瘤间质重构进程，从而增加实体肿瘤的局部侵袭能力。
　　第二部分 甲状腺滤泡癌样肾细胞癌的临床特征分析
　　为了研究甲状腺滤泡癌样肾细胞癌(TLFCK)的临床特点，明确肿瘤大小和位置对肿瘤血尿症状的影响。回顾所收治的一例患者的病历，同时自PubMed，Medline以及中文数据库收集了其他15例患者资料，然后进行汇总分析。首先将16名患者被分为男性组和女性组进行了分析。然后将所有的数据重新分类为血尿组和非血尿组，了解并分析血尿症状与肿瘤大小以及肿瘤位置之间的关系。结果显示TLFCK患者的平均年龄(42．06±16．66)岁，平均的肿瘤大小(4．83±2．95)厘米。其中女性占大多数(11／16，68．75％)。在所有的症状中，血尿症状出现最多(85．71％，6／7)，其次是腰腹部疼痛(57．14％，4／7)。与男性相比，女性患者往往比较年轻(36．00±9．26 VS．55．40±22．43，P=0．025)。当肿瘤大小达到或超过4．00厘米时更容易出现血尿(P=0．034)。此外，当肿瘤位于左侧肾脏或者某侧肾上极时更容易出现血尿症状(P=0．035，P=0．041)。除一例患者外，其余所有患者均接受了根治性肾切除术。综上所述，TLFCK主要发生在年轻女性，最常出现血尿症状。而且血尿的出现跟肿瘤的大小和位置有关。目前针对TLFCK进行根治性手术是比较智慧的选择，特别是出现血尿症状。

目录

声明

不同数量和不同分化阶段骨髓间充质干细胞对兔VX2膀胱肿瘤间质重构的影响

摘要

缩略语说明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图表

参考文献

甲状腺滤泡癌样肾细胞癌16例汇总分析：肿瘤大小和位置对肿瘤血尿症状的影响

摘要

缩略语说明

前言

病例与方法

统计学分析

结果

讨论

附图表

参考文献

MSCs impact tumor progression via promoting tumor stroma remodeling：an investigation on rabbit VX2 bladder tumor

ABSTRACT

Introduction

Materiais and Methods

Results

Discussion

Conclusion

FIGURES AND LEGENDS

References

The influence of tumor size and location on hematu ria of thyroid-like follicular carcinoma of the kidney：a pooled analysis of 16 cases

Abstract

Introduction

Patients and methods

RESULTS

DISCUSSION

FIGURES AND TABLES

References

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