异基因造血干细胞移植后aGVHD与调节性T细胞、Il-35、TREC的相关性分析

摘要

[研究背景与目的]
　　 异基因造血干细胞移植(allogeneichematopoieticstemcelltransplantation，allo-HSCT)是目前治疗急性白血病等恶性血液病的有效方法，移植物抗宿主病(graftversushostdisease，GVHD)是异基因造血干细胞移植后的一个极为重要的并发症，寻找有效的生物学指标以预测GVHD的发生发展对移植后患者的康复有重要的意义。调节性T细胞(regulatoryTcells，Treg)在1995年首次报道，并被命名为CD4+CD25+Treg，而后发现，叉头样转录因子(theforkheadorwingedhelixtranscription，Foxp3)是Treg细胞的另一个特征性标志，现许多研究已证明此类细胞在维持机体免疫耐受和免疫应答稳态方面有重要作用。白细胞介素(interleukin，IL)-35是近年来新发现的由Treg分泌的抑制性细胞因子，对免疫反应起负向调节作用，有研究表明IL-35在体外能直接抑制CD4+T效应细胞(Teffectorcell，Teff)增殖，同时Tregs中IL-35的大量表达与其抑制能力相关。作为判断胸腺近期输出功能的指标，T细胞受体重排删除环(TcellreceptorexcisionDNAcircles，TRECs)在评价移植后患者的免疫重建功能上有重要作用，而TREC是否参与移植物抗宿主病的发生尚未完全明了。本研究旨在检测异基因造血干细胞移植后发生急性移植物抗宿主病(acutegraftversushostdisease,aGVHD)的患者外周血中调节性T细胞、转录因子Foxp3mRNA、细胞因子IL-35及T细胞中受体重排删除环的水平并探讨各参数之间的相互关系，以期获得能够有效预测患者发生aGVHD的生物学指标。
　　 [研究对象与方法]
　　 外周血样品采集自接受造血干细胞移植术的患者，其中男17例，女6例，年龄8-46岁，aGVHD阳性组13例，aGVHD阴性组10例，同时将21例年龄及性别相匹配的健康人作为对照组。将aGVHD阳性组参照Glucksberg标准进行严重度分级，分为Ⅰ-Ⅱ度aGVHD组与Ⅲ-Ⅳ度aGVHD组。采用流式细胞术(FCM)检测各组外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比，应用实时定量PCR(RT-PCR)检测外周血单个核细胞中Foxp3转录因子的相对表达量和TREC水平，并且应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血血浆中Treg相关细胞因子IL-35的表达水平。
　　 [研究结果]
　　 (1)aGVHD阳性组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分比、单个核细胞中Foxp3转录因子的相对表达量、血浆中IL-35的表达水平较aGVHD阴性组和正常对照组明显降低(P＜0.05);且经有效治疗后各指标显著升高（P＜0.05）。
　　 (2)aGVHD阳性组中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分比、Foxp3mRNA的相对表达量与aGVHD的严重度分级成负相关（P＜0.05）。
　　 (3)配对样本资料分析显示，aGVHD发生时外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分比、Foxp3mRNA的相对表达量与aGVHD发生前1～2周相比明显下降（P＜0.05）。
　　 (4)部分移植后患者未能检测出TREC，aGVHD阴性组中有7例患者TREC水平在移植后随时间延长而逐渐恢复，aGVHD阳性组TREC水平低于aGVHD阴性组，但无统计学意义(P＞0.05)，同时二者均明显低于对照组(P＜0.05)。aGVHD阳性组中TREC水平与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分比、Foxp3mRNA的相对表达量、IL-35表达水平均无明显相关性(P＞0.05)。
　　 [研究结论]
　　 异基因造血干细胞移植后患者发生aGVHD时CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的百分比、其转录因子的表达量及IL-35水平均发生明显降低，且在治疗后明显升高，说明造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的发生与调节性T细胞、IL-35关系密切，这就为临床预测aGVHD的发生发展及预后提供了理论依据和实验室基础。部分移植后患者TREC水平在移植后随时间延长而逐渐恢复，提示移植后患者逐渐恢复免疫重建，aGVHD阳性组TREC水平低于aGVHD阴性组，提示TREC可能参与aGVHD的发生发展。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 前言

第二章 材料与方法

(一)研究对象

(二)实验材料

(三)实验方法

第三章 实验结果

(一)移植后患者基本情况

(二)外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+Treg的百分比

(三)外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的相对表达量

(四)血浆中IL-35的表达水平

(五)aGVHD发生时及发生前各指标的变化

(六)aGVHD治疗后各指标的变化

(七)移植后TREC水平的变化及各组之间的差异

第四章 讨论

第五章 结论

附表与附图

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文