纳米载银无机抗菌剂对白色念珠菌生物膜形成的影响

摘要

目的:
　　 探讨纳米载银无机抗菌剂(Nanometersilverbaseinorganicantimicrobialagent，NSBIAA)悬浊液对白色念珠菌生物膜形成的影响，检测纳米载银无机抗菌剂抑制白色念珠菌生物膜形成的有效作用浓度。探讨向义齿基托树脂（聚甲基丙烯酸甲酯，polymethylmethacrylate，PMMA）中添加NSBIAA对白色念珠菌初步粘附和生物膜形成的影响，检测能够抑制白色念珠菌初步粘附和生物膜形成的PMMA中NSBIAA的添加比例。为提高PMMA的抗菌性能，抑制白色念珠菌生物膜的形成，防治义齿性口炎提供实验依据。
　　 方法:
　　 1.配制106cell/ml的白色念珠菌菌液和10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.625mg/ml、0.312mg/ml、0.156mg/ml、0.078mg/ml、0.039mg/ml和0.019mg/ml共10个浓度的NSBIAAFUMATT200-5悬浊液。以96孔微量培养板为载体，培养72小时后，采用XTT生物膜活性检测法、结晶紫生物膜生物量定量法和结晶紫染色法观察不同浓度下白色念珠菌生物膜的变化。
　　 2.采用球磨法将NSBIAA加入PMMA中，利用不锈钢模具和压榨聚合一体机制作含有1％、2％、3％、5％(V/V)NSBIAA的PMMA试片，以12孔板为载体，在PMMA试片上构建白色念珠菌生物膜模型，采用荧光探针标记法和共聚焦激光扫描显微镜观察PMMA试片上白色念珠菌初步粘附状况和生物膜形成状况。
　　 结果:
　　 1.随着NSBIAA悬浊液浓度的升高，白色念珠菌生物膜活性降低，生物膜生物量减少，生物膜结构破坏。0.625mg/mlNSBIAA悬浊液中生物膜活性减少(96.1±3.0)％，生物膜生物量减少(95.4±2.7)％，且在镜下看不到生物膜形态。
　　 2.含有0％、1％、2％、3％(V/V)NSBIAA的PMMA试片上初步粘附的白色念珠菌的绿色荧光面积(GreenFluorescenceArea，GFA)、总荧光面积(TotalFluorescenceArea，TFA)和活菌百分比没有显著性差异，GFA＞95％，TFA＞5×104，活菌比例＞95％。含有5％NSBIAA的PMMA试片上GFA是(3.43±0.24)×104，TFA是(4.07±0.33)×104，活菌比例是(82.37±5.84)％，与其它几组相比有显著性差异。
　　 3.随着PMMA试片中NSBIAA添加比例的增加，PMMA试片上初步粘附的白色念珠菌芽管生成率，72小时后形成的生物膜厚度、活菌比例逐渐降低。含有3％、5％NSBIAA的树脂试片上初步粘附的白色念珠菌芽管生成率与其他三组有显著性差异，含有5％NSBIAA的PMMA试片上初步粘附的白色念珠菌芽管生成率为(60.26±5.0)％。含有5％NSBIAA的PMMA试片上形成的生物膜厚度与其他四组有显著性差异，只有(6.10±2.23)μm。含有3％NSBIAA的PMMA试片上形成的白色念珠菌生物膜内层、中间层、外层活菌比例与含有0％、I％NSBIAA，2％NSBIAA的PMMA试片上的同层生物膜活菌比例相比有显著性差异。通过CLSM观察发现随着PMMA试片中NSBIAA比例的增加，PMMA试片上的生物膜逐渐破坏，含有5％NSBIAA的PMMA试片上没有生物膜形成。
　　 结论:
　　 1.NSBIAA悬浊液对白色念珠菌生物膜的形成有抑制作用，0.625mg/mlNSBIAA悬浊液中没有白色念珠菌生物膜形成。
　　 2.含有NSBIAA的PMMA试片对白色念珠菌初步粘附没有明显抑制作用。
　　 3.含有NSBIAA的PMMA试片对白色念珠菌生物膜形成有抑制作用，含有5％NSBIAA的PMMA试片上没有白色念珠菌生物膜形成。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 纳米载银无机抗菌剂悬浊液对白色念珠菌生物膜形成的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第二部分 含有纳米载银无机抗菌剂的基托树脂(PMMA)对白色念珠菌生物膜形成的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

全文总结

参考文献

附图

致谢

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