耐药鲍曼不动杆菌临床分离株对胍类消毒剂抗性的研究

摘要

[背景]：
　　鲍曼不动杆菌（Acinetobacter Baumanii,AB）属于不动杆菌属（Acinetobacter），是需氧、不发酵糖类的革兰氏阴性杆菌，广泛分布于自然界、医院环境、人体皮肤和黏膜表面，是一种条件致病菌，对机体免疫力低下的危重患者，如重症监护室(ICU)和烧伤科的病人威胁较大，可以引起各种组织和器官感染，包括肺炎、脑膜炎、菌血症、尿路感染、外科伤口感染和软组织感染等[1]。近年随着临床广谱抗生素的广泛使用及介入性操作的普及，鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素的耐药性也呈逐年上升趋势，多重耐药菌比例明显增加[2]。近年来研究发现，鲍曼不动杆菌的耐药并不局限于抗生素，许多耐药鲍曼不动杆菌对医院常用消毒剂的抗力要高于标准菌株，这给医院消毒剂的选择与使用方法提出了新的要求，也对院内感染控制工作带来了新的挑战。
　　[目的]：
　　为了解鲍曼不动杆菌临床分离菌株耐药性和消毒剂抗性特征，本研究收集了山东省国家级医院感染监测点医院的46株鲍曼不动杆菌临床分离菌株，选择临床常用的26种抗生素进行体外药敏试验、用胍类消毒剂进行了抗性检测(MIC、MBC试验)，采用PCR扩增技术对部分菌株进行了消毒剂抗性基因筛查。其主要目的为:
　　(1)了解山东省医院鲍曼不动杆菌临床分离菌株临床分布和耐抗生素现状;
　　(2)分析比较临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌对胍类消毒剂（聚六亚甲基单胍和聚六亚甲基双胍）的抗抑菌效果;
　　(3)从分子水平上探讨消毒剂抗性基因、鲍曼不动杆菌耐药和消毒剂抗性表型之间的关系。
　　(4)为临床合理使用消毒剂，提高消毒效果，预防控制鲍曼不动杆菌引起的感染及相关疾病提供科学依据。
　　[方法]：
　　本研究收集了山东省济南市和临沂市的46株鲍曼不动杆菌临床分离菌株，使用药敏纸片和最小抑茵浓度试验(MIC)对鲍曼不动杆菌临床分离菌株耐药性进行监测;用酸性曙红比色法测定聚六亚甲基胍含量;使用消毒剂最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)测定鲍曼不动杆菌临床分离菌株对胍类消毒剂的抗性，并与标准菌株大肠杆菌(8099)和鲍曼不动杆菌(ATCC10501)进行比较;采用PCR扩增技术筛查鲍曼不动杆菌临床分离菌株消毒剂抗性基因携带情况。
　　[结果]：
　　(1)46株鲍曼不动杆菌临床分离菌株中，多重耐药菌者占93.48％(42/46)，不同地区、不同医院收集的菌株对抗生素耐药率存在差异。
　　(2)44株鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基单胍的MIC结果平均值和中位数分别是13.95(1.56～200)mg/L和6.25mg/L;对聚六亚甲基双胍的MIC结果的平均值和中位数分别是18.82(3.12～200)mg/L和12.5mg/L。
　　44株鲍曼不动杆菌临床分离菌株与鲍曼不动杆菌标准菌株ATCC10501、大肠杆菌标准菌株8099对聚六亚甲基单胍MIC实验结果相比，鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基单胍的抗力与鲍曼不动杆菌ATCC10501(t=0.636，p=0.528)和大肠杆菌8099（t=0.636，p=0.528）的差异无统计学意义。
　　44株鲍曼不动杆菌临床分离菌株与鲍曼不动杆菌ATCC10501、大肠杆菌8099聚六亚甲基双胍MIC实验结果相比，鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基双胍的抗力大于大肠杆菌8099（t=4.075，p＜0.001），与鲍曼不动杆菌ATCC10501（t=-0.901，p=0.372）的差异无统计学意义。
　　44株鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基单胍与聚六亚甲基双胍MIC实验结果相比，鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基双胍的抗性要强于聚六亚甲基单胍（t=-2.339，p=0.022）。
　　(3)36株鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基单胍的MBC结果平均值及范围、中位数分别是207.8(6.25～1600)mg/L和100mg/L;聚六亚甲基双胍的MBC的平均值及范围、中位数分别是380.9(12.5～1600)mg/L和400mg/L。
　　36株鲍曼不动杆菌临床分离菌株与鲍曼不动杆菌ATCC10501、大肠杆菌8099对聚六亚甲基单胍MBC实验结果相比，鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基单胍的抗力大于大肠杆菌8099（t=7.026，p＜0.001），与鲍曼不动杆菌ATCC10501（t=0.281，p=0.780）的差异无统计学意义。
　　36株鲍曼不动杆菌临床分离菌株与鲍曼不动杆菌ATCC10501、大肠杆菌8099聚六亚甲基双胍MBC实验结果相比，鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基双胍的抗力小于鲍曼不动杆菌ATCC10501（t=-2.562，p=0.015），但大于大肠杆菌8099（t=5.460，p＜0.001）。
　　36株鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基单胍与聚六亚甲基双胍MBC的实验结果相比，鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基双胍的抗性要强于聚六亚甲基单胍(t=-3.299，p=0.002)。
　　上述结果显示，聚六亚甲基单胍对鲍曼不动杆菌抑菌和杀菌能力大于聚六亚甲基双胍。
　　(4)选择23株鲍曼不动杆菌临床分离菌株进行消毒剂抗性基因携带情况分析，在其染色体和质粒上均未能检出qacA/B基因，qacA/B携带率为0％，结果显示未发现鲍曼不动杆菌临床分离菌株携带qacA/B基因;标准菌株大肠杆菌8099、临床分离的铜绿假单胞菌、大肠杆菌染色体及质粒上也均未检出qacA/B基因。23株鲍曼不动杆菌临床分离菌株中有21株在其染色体和质粒上均检出qacE△1-sul1基因，1株鲍曼不动杆菌临床分离菌株在其质粒上检出qacE△1-sul1基因，1株菌染色体和质粒上都未检出qacE△1-sul1基因，其质粒和染色体qacE△1-sul1基因携带率分别为95.65％(22/23)和91.30％(21/23)。在临床分离的1株铜绿假单胞菌和1株大肠杆菌染色体和质粒上均检出qacE△1-sul1基因。
　　[结论]：
　　(1)山东省济南市与临沂市鲍曼不动杆菌临床分离菌株呈多重耐药现象，不同地区、不同医院鲍曼不动杆菌临床分离菌株对抗菌药物的耐药性存在差异。
　　(2)聚六亚甲基单胍对鲍曼不动杆菌临床分离菌株的抑菌能力与鲍曼不动杆菌ATCC10501和大肠杆菌8099相比无差异;聚六亚甲基单胍对鲍曼不动杆菌临床分离菌株的杀菌能力与鲍曼不动杆菌ATCC10501无差异，但强于大肠杆菌8099。
　　聚六亚甲基双胍对鲍曼不动杆菌临床分离菌株的抑菌能力与鲍曼不动杆菌ATCC10501相比无差异，强于大肠杆菌8099;聚六亚甲基双胍对鲍曼不动杆菌临床分离菌株的杀菌能力比鲍曼不动杆菌ATCC10501较弱，强于大肠杆菌8099。
　　鲍曼不动杆菌临床分离菌株对聚六亚甲基双胍的抗性均要强于聚六亚甲基单胍，说明聚六亚甲基单胍对鲍曼不动杆菌临床分离菌株抑菌和杀菌能力要强于聚六亚甲基双胍。
　　(3)鲍曼不动杆菌临床分离菌株质粒和染色体qacA/B基因携带率均为0％，说明临床鲍曼不动杆菌菌株qacA/B基因携带率现象极低。而鲍曼不动杆菌临床分离菌株质粒和染色体qacE△1-sul1基因携带率分别为95.65％和91.30％，说明鲍曼不动杆菌临床分离菌株qacE△1-sul1基因携带是普遍现象。质粒上qacE△1-sul1基因高携带率高提示鲍曼不动杆菌可能易于在菌株之间进行基因抗性传播。鲍曼不动杆菌qacE△1-sul1基因阳性菌株与阴性菌株MIC、MBC结果对比，qacE△1-sul1基因与其抗性表型可能无必然联系。这一结论有待进一步深入研究。
　　(4)鲍曼不动杆菌是引起院内感染的重要条件致病菌，其多重耐药菌性呈逐年上升趋势。在医院对鲍曼不动杆菌引发的疾病防控措施中，阻断传播途径是重要手段之一。长期大量使用单一、不足量的消毒剂将使许多细菌对消毒剂产生了抗性，多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离菌株对胍类消毒剂的抗性超过标准菌株且携带消毒剂抗性基因，在临床使用消毒剂中应引起足够的重视，研究还表明，选择新型单胍类消毒剂效果要好于双胍消毒剂。