乳香酸和阿司匹林对APCMin/+小鼠肠腺瘤化学预防作用的比较研究

摘要

背景:结肠癌是常见的威胁人类健康的恶性肿瘤之一，其致死率在全球排第四位，并且呈上升趋势。结肠癌的发生和发展具有阶段性，包括异常隐窝病灶-息肉-腺瘤-结肠癌等阶段。腺瘤与结肠癌的流行病学特征相似，预防腺瘤的形成可以有效预防结肠癌的发生。APC(Adenomatous Polyposis Coli)基因突变经常发生在结肠癌的起始阶段，其在结肠癌的发生发展中的作用已经得到广泛研究。APCMin/+小鼠是研究人结肠腺瘤息肉病最好的动物模型之一，在其生命周期中（平均120天）能发生约30个肠道腺瘤结节病变，其发病过程类似于人结肠癌的发病进程。 流行病学研究表明，非甾体类抗炎药物能降低结肠癌发生的危险性。阿司匹林是其典型代表，也是最常用的非甾体抗炎药。据报道，长期服用阿司匹林能够有效地降低发生结肠癌的危险性。然而，长期服用阿司匹林所引起的副作用是不能忽视的，其中最常见的副反应是胃肠道出血。此外，从效益-风险评估的角度分析，目前并没有足够的数据可以提供确切的给药剂量和时间。AKBA(acetyl-11-keto-β-BA)是从乳香提取的有效成分之一。乳香被广泛用于炎性疾病的治疗已有数百年的历史，其中就包括炎性肠道疾病。近年来，AKBA的抗癌活性引起了人们的注意。本项研究旨在比较阿司匹林和AKBA对APCMin+小鼠肠腺瘤的化学预防作用。 方法:小鼠剪尾提取DNA鉴定获得突变型APCMin/+小鼠18只，将小鼠随机分为三组:对照组、阿司匹林组和AKBA组，每组各6只。小鼠5周龄时开始灌胃给药，连续给药7周。给药结束后处死小鼠，比较各组小肠和结肠腺瘤息肉的数目及大小。体内TUNEL法比较阿司匹林和AKBA诱导腺瘤细胞的凋亡作用;免疫组织化学法比较阿司匹林和AKBA对腺瘤组织蛋白β-catenin，cyclinD1，COX-2及5-Lox表达的影响;Western blotting法比较阿司匹林和AKBA对增值凋亡相关蛋白，Wnt信号通路及炎症因子的调控作用。 结果:AKBA和阿司匹林均能明显抑制腺瘤息肉的形成和发展。与对照组相比，AKBA治疗组小肠和结肠的腺瘤数目分别减少了45.7％和78.7％;阿司匹林治疗组小肠和结肠的腺瘤结节数目分别减少了27.6％和20.4％。对腺瘤大小分析显示，AKBA对较大腺瘤的抑制效果较为显著:使小肠段大腺瘤(2-3mm)数目减少了52.5％，结肠段大腺瘤(＞3mm)的数目减少了84.5％。分子水平分析表明，AKBA和阿司匹林对于腺瘤形成的抑制作用与其抗细胞增殖、促凋亡及抗炎作用有关，并且AKBA对Wnt信号通路的异常表达具有较强的调控作用。 结论:AKBA和阿司匹林均能预防APCMin+小鼠肠腺瘤的生长，但AKBA的预防疗效明显高于阿司匹林。AKBA的预防作用可能与其抗细胞增殖，促凋亡及抑制炎症因子表达有关;AKBA显著地抑制Wnt信号通路异常激活，可能与其作用机制有关。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

1 APC基因与结肠癌

1．1 APC基因与APCMin／+小鼠模型

1．2 Wnt信号通路

2 炎症与结肠癌的关系

3 非甾体抗炎药与结肠癌的预防

实验材料和方法

1 实验材料

1．1 化合物

1．2 实验动物

1．3 试剂

1．4 试剂配制

1．5 仪器设备

2．方法

2．1 APCMin+小鼠稳定传代和鉴定

2．2 AKBA和aspirin对APCMin+小鼠肠腺瘤生长抑制实验

2．3 免疫组织化学检测相关蛋白表达实验

2．4 TUNEL实验

2．5 Western blotting法检测相关蛋白表达

2．6 数据处理

3 实验结果

3．1 AKBA和aspirin对APCMin+小鼠肠腺瘤的抑制作用

3．2 AKBA和aspirin抑制腺瘤组织细胞的增殖并诱导细胞凋亡

3．3 AKBA抑制Wnt／β-catenin信号通路及其下游靶基因的异常激活

3．4 AKBA和aspirin对炎症因子的调控作用

讨论

结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的论文

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