不明原因复发性流产夫妇WNT6基因突变位点筛查及KIR2DL4基因多态性研究

摘要

本文主要从以下几个部分展开论述：
　　第一部分 WNT6基因在不明原因复发性流产夫妇基因突变位点的筛查
　　研究目的:通过对中国汉族100对不明原因复发性流产夫妇WNT6基因突变位点的筛查，探讨不明原因复发性流产是否与WNT6基因突变相关。
　　研究方法:利用PCR扩增及Sanger法基因测序技术，对中国汉族100对不明原因复发性流产夫妇和中国汉族100对正常生育夫妇行WNT6基因4个外显子的基因序列及相关侧翼序列检测。与Ensembl提供的正常序列比对，分析WNT6基因编码序列是否存在异常碱基改变、插入或缺失。若发现新的突变位点，则扩大对照组样本量，进一步验证突变位点是否只存在于病例组。后续应用多个在线软件预测突变位点对基因功能的影响。
　　研究结果:测序结果显示病例组4名女性患者WNT6基因各自筛查出4个新发突变位点:1个位于内含子1与外显子1交界序列，属无义突变;2个位于外显子3编码序列，一个错义突变，一个同义突变;1个位于3'UTR区域，突变意义不详。病例组男性患者及对照组夫妇双方均未发现相同突变位点。位于该基因外显子3的错义突变为c.443T＞G，该突变位于WNT1功能域，突变导致编码氨基酸改变，且两种氨基酸的化学结构和性质均不同，进一步的蛋白质模型预测表明其蛋白质的结构受到影响。扩大对照组女方样本量1倍，仍未发现相同的新发错义突变位点。所有样本均未检测到已知的SNPs位点。
　　结论:不明原因复发性流产女性患者WNT6基因错义突变可能是导致复发性流产的原因之一，为复发性流产的病因学研究补充新内容，在国际上未见相同报道，仍需要进一步的功能实验验证。
　　第二部分 KIR2DL4基因多态性与不明原因复发性流产的相关性研究
　　研究目的:本研究对96对中国汉族不明原因复发性流产患者夫妇进行KIR2DL4基因多态性分析，探讨KIR2DL4基因多态性与不明原因复发性流产相关性。
　　研究方法:以96对不明原因复发性流产夫妇和94对正常生育夫妇为研究对象，对KIR2DL4基因外显子3、外显子5、外显子7、外显子8和外显子9基因序列行PCR-SBT扩增测序，即采用两对引物，外显子3和5用一对引物，外显子7、8和9用一对引物，扩增产物经两步纯化后，用四对引物分别从上、下游测序，测序方法采用直接基因测序技术。分析基因在总人群中等位基因频率的发生率，以及外显子7的9A/10A多态位点等位基因频率在病例组和对照组的差异。
　　研究结果:测序结果分析显示该研究中国汉族人群的基因型分布符合文献报道的中国人群的基因型分布。而位于跨膜区域第7外显子10A/9A多态位点:基因型频率比较发现，本研究人群中总的基因型频率的比较无统计学差异;夫妇一方或夫妇双方的基因型频率在两组之间均无明显差异。等位基因型频率比较发现，该多态位点等位基因型频率在本研究人群中与中国汉族人群报道的等位基因型频率比较无统计学差异;两组中男方或夫妇双方的等位基因基因型频率无明显统计学差异。女方9A等位基因型频率(19.3％)高于对照组(14.9％)，9A单倍体型在病例组有增高的趋势，但经过统计学分析，差异无显著性。
　　结论:KIR2DL4基因多态性与不明原因复发性流产的发生无相关性。KIR2DL4等位基因型9A在不明原因复发性流产女性患者中有增高的趋势，需要进一步扩大样本研究证实。

目录

声明

摘要

符号说明

第一部分 WNT6基因在不明原因复发性流产夫妇基因突变位点的筛查

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

附图附表

参考文献

第二部分 KIR2DL4基因多态性与不明原因复发性流产的相关性研究

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

附图、附表

参考文献

综述 复发性流产的病因学研究

致谢

攻读博士学位期间撰写和发表的论文

学位论文评阅及答辩情况表

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