重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白抑制强直性脊柱炎趋化因子CXCL16及其受体CXCR6的表达

摘要

目的：强直性脊柱炎(AS)是一种慢性炎症性自身免疫性疾病，其发病机制复杂，至今仍未明确。近来研究发现在趋化因子和炎症因子共同构成的因子网络系统中，分子间通过相互作用及相互影响，在AS的发病机制中起着关键作用。CXCL16为趋化因子CXC亚族的一种多功能趋化因子，在炎症-免疫反应中发挥重要作用，且已有研究发现CXCL16在AS外周血中明显升高，但其在AS发病机制中的作用并不清楚。故本研究将通过检测AS患者外周血细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、CXCL16及CXCR6的表达水平，CXCL16对淋巴细胞增殖活化的影响以及比较重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR∶Fc)治疗前后外周血中CXCL16、CXCR6表达水平的变化，初步探讨CXCL16/CXCR6在AS发病中的作用机制及rhTNFR∶Fc与之相关的作用机理。
　　方法：收集22例AS活动期患者，给予rhTNFR∶Fc25mg，皮下注射，每周2次，连续治疗3个月;另选取22名年龄、性别与AS患者相匹配的健康体检者作对照。用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测血清RANKL、OPG及CXCL16表达水平，荧光定量PCR法分别检测外周血单个核细胞CXCL16、CXCR6 mRNA表达水平，CCK-8法和ELISA法分别探查不同浓度的CXCL16重组蛋白(40ng/ml、80ng/ml)刺激淋巴细胞的增殖情况及培养上清中RANKL的表达水平。用t检验、单因素方差分析及Pearson法进行统计学分析。
　　结果：①单用rhTNFR∶Fc治疗3个月后，AS患者临床效果达ASAS20的有21例，占95.45％，达ASAS40的有18例，占81.82％，达ASAS70的有12例，占54.55％，各疗效指标血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、Bath AS活动指数(BASDAI)、Bath AS功能指数(BASFI)、脊柱痛、夜间痛均较治疗前显著下降（t=8.38，t=8.45，t=13.23，t=10.72，t=24.91，t=39.14，P均＜0.05）。②AS活动组患者血清RANK水平、RANKL/OPG比值均高于健康对照组[(6.01±1.00)pmol/lvs(3.41±0.61)pmol/l，t=10.41;(0.98±0.16)vs(0.62±0.16)，t=7.45，P均＜0.05]。③AS活动组患者血清CXCL16的表达均高于健康对照组及AS治疗组[(2.28±0.15)ng/mlvs(1.83±0.11)ng/mlvs(1.82±0.12)ng/ml，t=11.37，t=11.35，P均＜0.05]，外周血单个核细胞CXCL16、CXCR6 mRNA的表达也均高于健康对照组及AS治疗组[(0.058±0.030)vs(0.033±0.008)vs(0.034±0.014),t=3.74,t=3.37,(0.046±0.024)vs(0.020±0.007)vs(0.025±0.009),t=4.96,t=4.06,P均＜0.05]。④在CXCL16(40ng/ml和80ng/ml)刺激下，AS活动期淋巴细胞增殖能力明显高于无CXCL16组[(136±31)％vs(183±35)％vs(100％)，t=5.52，t=11.25，P均＜0.05]，健康对照组经CXCL16刺激后淋巴细胞增殖能力虽有所提高，但刺激前后差异无统计学意义（P均＞0.05）。AS活动期RANKL表达水平明显高于无空白对照组[（1.439±0.091）pmol/lvs(1.85±0.111)pmol/lvs(1.097±0.088)pmol/l,t=11.49,t=25.55，P均＜0.05]。⑤AS活动组血清CXCL16表达水平与RANKL、RANKL/OPG比值及ESR、CRP等临床指标成正相关(r=0.87，r=0.8，r=0.45，r=0.639，P均＜0.05)，与OPG无显著相关性(r=0.075，P＞0.05)。
　　结论：CXCL16/CXCR6在AS的发病中可能发挥着重要作用，作为目前最有效的靶向治疗手段之一，rhTNFR∶Fc降低CXCL16/CXCR6的表达可能是其抑制AS炎症反应及骨质破坏的重要作用机制之一。

目录

声明

摘要

英文缩写及符号说明

前言

资料和方法

一、患者与健康对照

二、治疗方案

三、试剂与仪器

四、实验方法

五、统计学处理

结果

1．ASAS疗效及疗效指标变化

2．血清RANKL及OPG的表达

3．CXC16及CXCR6的表达

4．CXCL16对淋巴细胞增殖的影响

5．CXCL16刺激淋巴细胞分泌RANKL

6．CXCL16与RANKL、OPG及临床指标的相关性分析

讨论

结论

附录

参考文献

综述 趋化因子CXC亚家族及其受体与系统性红斑狼疮的相关研究

致谢

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