Wnt3a在大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中对神经细胞自噬和凋亡的影响

摘要

目的：
　　蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage，SAH)是由于多种原因引起的脑血管突然破裂，使血液进入颅内或椎管内的蛛网膜下腔所引起的综合征，致死致残率较高。蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤(Early brain injury，EBI)，与患者的预后有关。
　　以往对蛛网膜下腔出血的研究主要集中在发病后的脑血管痉挛方面，对神经元损伤及转归研究并不多见。有研究表明，外伤和炎症能激活神经细胞的自噬和凋亡。本研究尝试探讨蛛网膜下腔出血后早期海马神经元的自噬和凋亡的变化及其规律。近期有研究表明wnt3a具有减轻脑神经细胞凋亡，促进神经发生的作用，因此，我们应用wnt3a作为干预剂，研究wnt3a对蛛网膜下腔出血后早期海马神经元的自噬和凋亡的作用，探讨Wnt3a在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤中对神经细胞自噬和凋亡的影响。
　　方法：
　　1.实验动物选择:选取120只健康雄性SD大鼠，250-300g之间，随机分配，完成假手术组(Sham control group)、SAH组(Subarachnoid hemorrhage group)、Wnt3a(wnt3a group)组各25只，各组根据时间点不同，又分为0h、12h、24h、48h、72h五个亚组。
　　2.蛛网膜下腔出血模型建立:利用自体血二次注入枕大池建立模型
　　3.检测:Western blot检测LC3、beclin-1、caspase-3的蛋白表达情况，应用免疫组化染色技术观察bax蛋白的表达情况，根据HE染色观察各组大鼠海马的凋亡情况。
　　4.统计学分析:应用SPSS19.0统计学软件对所得资料进行统计分析，数据以x±s表示。应用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1.Western blot显示出血组LC3Ⅱ、beclin-1出血后12h开始升高，于24h达高峰，然后48h、72h逐步下降; caspase-3出血后12h开始升高，48h达高峰，72h时开始下降。
　　2.Westenblot显示，24h检测自噬相关蛋白的表达情况，出血组高于对照组，低于wnt3a组;48h检测凋亡相关蛋白的表达情况，出血组高于对照组，wnt3a组虽高于对照组，但相比出血组有明显降低。
　　3.免疫组化显示，wnt3a组24h beclin-1阳性神经元较出血组增多。48hwnt3a组Bax阳性神经元较出血组减少，凋亡细胞减少(p＜0.05)。
　　结论：
　　蛛网膜下腔出血后，自噬和凋亡均增强。自噬出血后呈上升趋势，24h达高峰;凋亡出血后呈上升趋势，48h达高峰。wnt3a可能促进了大鼠蛛网膜下腔出血后神经元的自噬，减少了神经元细胞的凋亡。

目录

声明

摘要

英文缩写一览表

前言

材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

3．westen-blot分析

4．组织学检查

5 统计学处理

结果

1 Western blot检测蛋I鲁LC3-Ⅱ、beclin-1、和caspase-3的表达

2 大鼠海马神经元的形态学变化

3 免疫组化方法检测大鼠海马神经元中beclin-1、bax的表达情况

讨论

1 模型的选取

2 蛛网膜下腔出血

3 Wnt3a

4 自噬和凋亡

结论

附图

参考文献

综述 蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中细胞自噬的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的文章