人类白细胞抗原-E在宫颈癌中的表达及意义

摘要

子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，发病可能与病毒感染、性生活紊乱及分娩次数、吸烟、营养不良等因素有关。宫颈癌早期常无特征性的临床表现，但伴随病变进展患者可以出现不规则地阴道流血、阴道排液增多，晚期可因癌灶累及范围的不同而出现不同的继发症状。近年来随着宫颈细胞学筛查技术的不断提高与广泛应用，使得癌前病变检出的比例增加。宫颈癌根据病理类型的不同可分为宫颈鳞状细胞癌、腺癌、腺鳞癌以及其他少见病理类型。从病因学上看，宫颈鳞癌、腺癌与腺鳞癌具有一共同特征——高危型人类乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)的持续感染。从HPV持续感染发展到宫颈癌很大程度上是由免疫系统的调控失灵以及肿瘤细胞的免疫逃逸所造成的。
　　人类白细胞抗原E(human leukocyte antigen-E，HLA-E)是一种非经典的HLA-Ⅰ类分子，在人类的组织和细胞中能够广泛转录，但其蛋白的表达主要局限于内皮细胞以及机体的免疫细胞，在正常组织细胞中仅能检测到极低的细胞表面表达。已有研究发现HLA-E在多种肿瘤的肿瘤组织及患者血清中表达上调，而目前关于HLA-E在宫颈癌中表达水平的研究鲜有报道，据此本实验设计通过免疫组织化学法，探索HLA-E在宫颈癌、宫颈高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamousintraepithelial lesion，HSIL)及癌旁正常宫颈组织中的表达水平，同时应用酶联免疫吸附试验测定法检测宫颈病变患者及宫颈正常者血清可溶性人类白细胞抗原E(soluble human leucocyte antigen E，sHLA-E)水平，意在探讨HLA-E在宫颈癌免疫逃逸中所发挥的作用及其可能存在的临床应用价值。
　　目的:
　　检测宫颈癌、HSIL及癌旁正常宫颈组织中的HLA-E蛋白的表达情况，同时检测宫颈癌、HSIL及子宫肌瘤组患者血清中sHLA-E与鳞状细胞痛相关抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCC）的表达水平，从而探究HLA-E与宫颈癌的临床病理特点的关系及其在宫颈癌免疫逃逸中所发挥的作用，评价sHLA-E对于宫颈癌及癌前病变诊断的临床应用价值。
　　方法:
　　取宫颈癌患者石蜡标本74例，HSIL患者石蜡标本18例，另外取其中20例宫颈癌的癌旁正常组织的石蜡标本作为对照组。血清标本来源于因宫颈癌、HSIL及子宫肌瘤于山东省立医院妇科就诊的患者，根据术后病理组织检查结果得知:HSIL患者15例，宫颈癌患者30例，子宫肌瘤患者15例。
　　1.利用免疫组化法（超敏二步法）检测HLA-E蛋白在18例HSIL病变宫颈组织、74例宫颈癌癌灶及其对应的20例癌旁正常宫颈组织中的表达情况，并评价其表达水平与宫颈癌的临床病理特点（临床分期、组织学类型、肿瘤分化程度、肿瘤直径大小、淋巴结转移、肌层浸润深度）间的相关性。
　　2.应用ELISA法检测45例宫颈病变(包括30例宫颈癌及15例HSIL)患者和15例宫颈正常患者（子宫肌瘤患者）血清中sHLA-E表达，比较其在这三组患者血清中表达水平的差异性。同时应用电化学发光法检测三组患者血清中SCC的表达水平。
　　3.评价sHLA-E在宫颈病变诊断中的临床应用价值应用ROC曲线比较sHLA-E及SCC对宫颈病变的诊断价值，探讨sHLA-E在宫颈癌早期诊断中的潜在临床应用价值。
　　结果:
　　1.免疫组织化学染色结果显示:HLA-E蛋白在宫颈癌及HSIL患者中的表达水平明显高于癌旁正常宫颈组织(P＜0.01)，HLA-E蛋白在宫颈癌患者中的表达亦高于HSIL患者(P＜0.01)。HLA-E蛋白的表达水平与宫颈癌的临床分期、肿瘤直径大小以及肌层浸润深度密切相关(P均小于0.05)，而与组织学类型、组织分化程度及淋巴结转移与否无关(P均大于0.05)。
　　2.ELISA结果显示:宫颈癌组和HSIL组血清中sHLA-E的浓度均高于对照组，并且差异具有统计学意义（P＜0.05）。血清sHLA-E水平与宫颈癌的临床病理特点进行比较分析，结果显示血清sHLA-E水平与宫颈癌的临床分期、分化程度、淋巴结转移、组织学类型、肿瘤直径大小及浸润深度之间并无明显相关性（P均大于0.05）。
　　3.ROC曲线分析显示sHLA-E(AUC∶0.803)对于宫颈癌中的诊断价值高于SCC(AUC∶0.783)，对于宫颈癌诊断的敏感性和特异性分别为63.30％和76.70％，并且sHLA-E对于宫颈腺癌及HSIL的诊断价值均高于SCC，结果有统计学意义(P均小于0.05)。
　　结论:
　　1.本研究证实了HLA-E蛋白在宫颈癌的癌灶组织以及在宫颈癌患者血清中的表达均高于宫颈正常组，推测其可能参与宫颈癌的免疫逃逸，为研究宫颈癌发生发展过程中免疫系统的改变提供了新的思路，其具体的分子机制还有待于深入研究。
　　2.本研究结果发现sHLA-E在宫颈癌早期诊断中敏感性高于SCC但特异性较低，与其他特异性较高的肿瘤标志物的联合应用有助于提高其对于宫颈痛的诊断价值，而且sHLA-E对于宫颈腺癌及HSIL的诊断价值均高于SCC。因本实验的标本数量有限，因此尚需大样本数量的实验进行检验验证。关于sHLA-E的研究可为宫颈癌的早期诊断提供一个潜在的血清学标志物，具有一定的临床应用价值。

目录

声明

摘要

英文缩写及符号说明

第一章 前言

1．1 研究背景

第二章 材料与方法

1．实验材料

2 主要试剂与仪器

3 实验方法

第三章 结果

1 临床资料说明

2 免疫组化法检测HLA-E在富颈癌组织中的表达水平

3 ELISA法检测sHLA-E在宫颈病变患者血清中的表达水平

4 电化学发光法检测血清标本中的SCC的表达水平

5 应用ROC曲线评估sHLA-E及SCC在富颈病变中的诊断价值

第四章 讨论

1 宫颈癌患者机体免疫系统的主要改变

2 HLA-E与宫颈癌免疫逃逸机制的关系

3 HLA-E与宫颈癌临床病理特点的关系

4 HLA-E基因多态性与HLA-E蛋白表达水平的研究

5 sHLA-E在宫颈病变患者血清中的表达

6 sHLA-E在宫颈病变早期诊断中的临床应用价值

第五章 结论

附图表

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文