奥美拉唑和5-氟尿嘧啶合用对人胃癌细胞的抗增殖、迁移作用研究

摘要

目的:
　　癌症极大地威胁着人类的生存和健康。胃癌是世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。目前临床上针对胃癌的治疗方法主要有手术，放射疗法，化学疗法和生物靶向疗法等。由于胃癌早期检出率低，大多数患者确诊时已是晚期，失去手术切除的机会，药物化疗是晚期胃癌和根除性手术术后复发的主要治疗手段。常用的胃癌化疗药物有铂类、氟尿嘧啶类、紫杉类、拓扑异构酶Ⅰ抑制剂等。上述药物组成的多药联合化疗方案，与传统药物联合化疗相比大大提高了疗效和患者生存率。尽管近年来胃癌的临床诊断和治疗都有了很大进步，但患者五年存活率依旧很低。5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-Fu)是治疗胃癌的基础药物之一，通过干扰DNA合成发挥抗癌作用，然而和其他抗癌药物一样，多药耐药和不可忽视的毒副反应限制了其在临床中的应用。因此寻找有效的增效减毒联合化疗药物，具有重要的临床意义。质子泵抑制剂是治疗胃酸分泌过多相关疾病的常用药物，近年来研究表明，质子泵抑制剂能够提高化疗药物敏感性，具体作用机制并不完全明确。有报道奥美拉唑(Omeprazole，OPZ)联用止吐剂能够更好地减轻5-Fu、顺铂导致的胃肠道反应。因此，本课题我们选取了奥美拉唑，在细胞水平上研究了和5-Fu合用后对人胃癌细胞株SGC-7901的抗肿瘤作用，并探讨其可能的作用机制。
　　方法:
　　常规体外培养胃癌SGC-7901细胞系。采用MTT法及克隆形成实验检测奥美拉唑和5-Fu单用及合用对SGC-7901细胞的生长抑制作用。采用Hoechst33342核酸染色实验显微镜下观察细胞凋亡形态变化;采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡数目。采用碘化丙啶(PI)染色法通过流式细胞仪检测奥美拉唑和5-Fu单用及合用对SGC-7901细胞的周期分布影响。采用划痕实验和Transwell细胞迁移实验检测奥美拉唑和5-Fu单用及合用对SGC-7901细胞迁移能力的影响。采用Transwell细胞侵袭实验检测奥美拉唑和5-Fu单用及合用对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。采用Western blotting法检测相关蛋白表达水平。
　　结果:
　　1.奥美拉唑和5-Fu合用24h后对SGC-7901细胞的生长抑制率低于单用5-Fu，但合用48h、72h后抑制率显著高于单用5-Fu，40 ug/ml奥美拉唑与10，20，40ug/ml5-FU合用48h后对细胞生长抑制作用均呈现协同作用;2.奥美拉唑和5-Fu合用能将SGC-7901细胞阻滞于G0/G1期，该阻滞作用与降低cyclinD1、cyclinE1、CDK2蛋白的表达有关;3.与单用5-Fu相比，奥美拉唑和5-Fu合用能更显著诱导SGC-7901细胞凋亡，呈现明显的染色质凝集、边缘化或核膜破裂的现象，早期凋亡细胞数显著增加;4.Western blotting实验结果显示与单用5-Fu相比，奥美拉唑和5-Fu合用后Bax/Bcl-2的比率提高，PARP蛋白的裂解水平增加，cleavedcaspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达明显增加;5.奥美拉唑和5-Fu合用能抑制SGC-7901细胞的迁移能力;6.奥美拉唑和5-Fu合用能抑制SGC-7901细胞的侵袭能力;7.奥美拉唑和5-Fu合用对SGC-7901细胞的迁移、侵袭能力抑制作用与抑制MMP-2活性形式的蛋白表达有关。
　　结论:
　　奥美拉唑和5-Fu合用可通过诱导细胞凋亡、诱发G0/G1期阻滞对SGC-7901细胞的增殖发挥协同抑制作用，通过抑制活性MMP-2的表达发挥抑制迁移、侵袭作用，且合用效果明显优于单用。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

1．胃癌的化学治疗

2．5-Fu的抗癌现状

3．质子泵抑制剂

3．1 质子泵抑制剂简介

3．2 质子泵抑制剂的临床应用

3．3 质子泵抑制剂的作用机制

3．4 质子泵抑制剂在癌症治疗中的研究现状

4．本课题研究内容

实验部分

1．实验材料

1．1 化合物

1．2 细胞株及培养条件

1．3 试剂

1．4 仪器设备

1．5 试剂配制

2．实验方法

2．1．细胞培养及冻存

2．2．细胞生长抑制实验

2．3．细胞克隆形成抑制实验

2．4．Hochest33342染色实验

2．5．AnnexinV-FITC／PI双染检测细胞凋亡实验

2．6．细胞周期检测实验

2．7．Western blotting法检测相关蛋白表达实验

2．8．细胞迁移实验

2．9．Transwell细胞侵袭实验

3．实验结果

3．1．奥美拉唑和5-Fu合用对胃癌细胞SGC-7901体外生长的抑制作用

3．2．奥美拉唑和5-Fu合用诱导SGC-7901细胞凋亡

3．3．奥美拉唑增强5-Fu诱导SGC-7901细胞G0／G1期阻滞作用

3．4．奥美拉唑和5-Fu合用抑制SGC-7901细胞体外迁移与侵袭

讨论

结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文