Salubrinal在氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元凋亡中的作用及机制

摘要

第一部分 Salubrinal对癫痫大鼠海马神经元凋亡的保护作用及机制研究
　　目的
　　研究癫痫大鼠海马神经元的凋亡及Salubrinal对凋亡的保护作用，并探讨其机制。
　　方法
　　60只成年雄性并且健康的wistar大鼠随机分为对照组、PILO组（氯化锂-匹鲁卡品诱导的大鼠癫痫模型）、Salubrinal(Sal)+PILO组及Sal组。TUNEL和免疫组化观察对照组和处理组癫痫持续状态(SE)后24h海马神经元的凋亡。Western blot实验分析海马elf2α、P-elf2α、Parkin及LC3的表达情况。
　　结果
　　1、PILO组与对照组相比海马神经元存在明显的凋亡。
　　2、较PILO组而言，Sal+PILO组海马神经元凋亡明显减轻。
　　3、Sal+PILO组与PILO组相比，海马神经元P-elf2α表达量增高(P＜0.05)，而elf2α表达无明显变化;LC3Ⅱ的表达量及Parkin显著增高(P＜0.05)。
　　结论
　　1、氯化锂-匹鲁卡品诱导的癫痫大鼠存在海马神经元凋亡。
　　2、Salubrinal能够减轻癫痫大鼠海马神经元凋亡，其机制可能是Salubrinal通过elf2α磷酸化上调parkin表达、增加自噬水平，进而有效减少癫痫大鼠海马神经元调亡。
　　关键词:Salubrinal;elf2α;癫痫;自噬;凋亡
　　第二部分 Parkin介导的线粒体自噬对癫痫大鼠海马神经元凋亡的保护作用
　　目的
　　明确Parkin介导的线粒体自噬对癫痫大鼠海马神经元凋亡的保护作用。
　　方法
　　用Parkin过表达重组腺病毒转染大鼠海马CA1区7天后，腹腔注射氯化锂-匹鲁卡品诱导大鼠颞叶癫痫模型。将60只健康雄性wistar大鼠随机分为4组，野生型对照组（Ctr组）;匹鲁卡品癫痫组（PI组）;匹鲁卡品+Parkin过表达腺病毒组(PIPO组)以及Parkin过表达腺病毒组+生理盐水（PO组）。观察和比较Ctr组和处理组癫痫持续状态(SE)后24h海马CA1区凋亡的变化。Western blot分析和比较各组海马Parkin及LC3的蛋白表达情况。透射电镜下观察和比较各组大鼠海马自噬小体和凋亡小体的数量。
　　结果
　　1、与Ctr组相比，PI组海马CA1区凋亡数量明显增多，而PIPO组海马凋亡数量较PI组明显减少(P＜0.05)。
　　2、与Ctr组相比，透射电镜下PI组海马神经元线粒体超微结构明显破坏，自噬小体和凋亡小体数量明显增多;与PI组相比，PIPO组海马神经元线粒体超微结构破坏减轻，自噬小体数量明显增加，但凋亡小体数量明显减少。
　　3、Western blot实验分析显示，与Ctr组相比，PI组Parkin表达水平降低，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P＜0.05)。与PI组比较，PIPO组Parkin和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均明显升高(P＜0.05)
　　结论
　　1、氯化锂-匹鲁卡品诱导的癫痫大鼠海马Parkin表达水平下降，伴随明显的凋亡及线粒体损伤。
　　2、Parkin过表达可减轻癫痫大鼠的凋亡和线粒体损伤，Parkin介导的线粒体自噬对氯化锂-匹鲁卡品癫痫大鼠海马神经元凋亡具有保护作用。
　　关键词:Parkin;癫痫;凋亡;线粒体;自噬

目录

声明

摘要

符号说明

第一部分 Salubrinal对癫痫大鼠海马神经元凋亡的保护作用及机制研究

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

附图

第二部分 Parkin介导的线粒体自噬对氯化锂-匹鲁卡品癫痫大鼠海马凋亡的保护作用

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

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