声明
摘要
第一章 绪论
引言
1.1 荧光简介
1.2 生物荧光染料
1.2.1 染料与探针的区别
1.2.2 经典的生物荧光染料
1.2.3 生物荧光探针
1.3 双光子吸收过程和双光子荧光显微镜
1.3.1 双光子吸收
1.3.2 双光子荧光显微及其成像的优点
1.3.3 双光子荧光显微技术所面临的荧光染料的问题
1.4 双光子生物荧光染料(染料及探针)的研究进展
1.4.1 双光子生物荧光染料的研究现状
1.4.2 双光子荧光生物探针的研究进展
1.5 本论文的研究意义、内容与创新
参考文献
第二章 双光子生物荧光染料分子设计合成与表征
2.1 双光子有机荧光生物染料分子设计的基本原则
2.2 双光子有机荧光生物染料分子的合成与表征
2.2.2 双光子有机荧光生物染料分子的合成路线与详细步骤
参考文献
第三章 双光子有机荧光染料平台性能研究和探针的改造
引言
3.1 双光子染料平台的设计
3.2 实验药品、试剂、仪器与方法
3.3 相关的计算
3.3.1 荧光量子产率
3.3.2 双光子吸收截面
3.4 细胞实验
3.4.1 活细胞培养
3.4.2 细胞的染色实验
3.4.3 共染实验
3.4.4 成像实验
3.4.5 细胞活性实验
3.5 结果与讨论
3.5.1 染料BTVPA的性能研究
3.6 BTVPA染料分子在开发双光子核酸探针BTVPA-nucleic acid中的应用
3.6.1 BTVPA-nucleic acid光物理性质研究
3.6.2 BTVPA-nucleic acid的双光子细胞成像
3.7 本章小结
参考文献
第四章 双光子RNA探针的性能研究与其在医学诊断中的应用探讨
引言
4.1 RNA探针的设计
4.3 实验药品、试剂、仪器与方法
4.3 相关的计算
4.3.2 RNA结合常数
4.4 细胞实验
4.4.1 活细胞培养
4.4.2 固定细胞实验
4.4.3 细胞的染色实验
4.4.4 RNA消化实验
4.4.5 细胞活性实验
4.4.6 成像实验
4.5 结果与讨论
4.5.1 探针的光物理性质
4.5.2 探针与RNA/DNA的相互作用
4.5.3 RNA、DNA荧光滴定实验
4.5.4 细胞的单、双光子荧光成像
4.5.5 RNA消化实验
4.5.6 与S-111342共染实验
4.5.7 MTT实验
4.5.8 光稳定性
4.5.9 荧光成像研究癌细胞的核仁、核与细胞轮廓的形态及在医学诊断中的探讨
4.6 本章小结
参考文献
第五章 双光子线粒体DNA探针的性能研究
引言
5.1 线粒体DNA探针的设计
5.2 实验药品、试剂、仪器与方法
5.3 相关的计算
5.3.1 DNA浓度的计算
5.3.2 DNA结合常数
5.4 细胞实验
5.4.1 活细胞培养
5.4.2 固定细胞实验
5.4.3 细胞的染色实验
5.4.4 DNA消化实验
5.4.5 细胞活性实验
5.4.6 成像实验
5.5 结果与讨论
5.5.1 光物理性质研究
5.5.2 探针DMT-M和DMT-E与DNA的相互作用
5.5.3 探针DMT-M和DMT-E与DNA作用前后的双光子性能
5.5.4 细胞的单、双光子荧光成像
5.5.5 细胞的共定位
5.5.6 CCCP消除膜电位实验
5.5.7 DNA消化实验
5.5.8 探针与S-111342共染实验
5.5.9 MTT实验
5.5.10 光稳定性
5.5.11 DMT-M和DMT-E与Hoechest共染
5.6 本章结论
参考文献
第六章 新型双光子内质网探针的初步探索
引言
6.1 新型内质网探针的设计
6.2 实验药品、试剂、仪器与方法
6.3 相关的计算
6.4 细胞实验
6.4.1 细胞培养
6.4.2 固定细胞实验
6.4.3 细胞的染色实验
6.4.4 成像实验
6.4.5 细胞活性实验
6.5 结果与讨论
6.5.1 光物理性质研究
6.5.2 活细胞的单、双光子荧光成像
6.5.3 固定细胞的单、双光子荧光成像
6.5.4 MTT实验
6.6 本章结论
参考文献
第七章 总结与展望
7.1 论文总结
7.2 创新点
7.3 有待开展的工作
致谢
攻读博士学位期间发表论文
附录