BRF2在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉发病过程中的作用研究

摘要

背景及目的:
　　慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis，CRS)是一种病程超过12周的、鼻窦黏膜的炎症性疾病，且多与鼻炎同时存在。按照CPOS-2007的分类方法，CRS分为不伴有鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis without nasal polyps，CRSsNP)和伴有鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CRSwNP)。CRS的病因学十分复杂，细菌感染、变态反应、鼻部解剖学异常被认为是该病的三大主要致病因素，并且三者是相互联系相互影响的。CRSsNP通常以非感染性、非变应性的炎症过程形式存在，CRSwNP则多与变应性因素有关。BRF2蛋白由BRF2基因（位于染色体8p12位置）转录翻译产生，是转录因子ⅢB上的亚基，参与RNA聚合酶Ⅲ催化小分子RNA生成。BRF2被广泛报道在肺癌、乳腺癌等多种癌症患者的肿瘤组织中高表达，并有研究表明BRF2的高表达与肺癌患者的预后存在相关关系。综上推测，BRF2基因与转录因子ⅢB之间的关系可能决定了BRF2蛋白在疾病发生发展过程中存在重要的调控作用。多项研究表明，炎症、氧化应激、内质网应激三者是相互联系的。Gouge J等发现BRF2参与调控细胞的氧化应激，而细胞的氧化应激与内质网应激高度相关。蛋白GRP78是一种内质网应激标示物。故我们猜想BRF2在CRSwNP中的作用可能与蛋白GRP78有关。本实验目的在于探讨BRF2在CRSwNP发生发展中的意义。
　　方法:
　　选取山东大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CRSwNP)住院并手术的患者37例，收集手术中获得的鼻息肉组织作为实验组（即CRSwNP组）;选取未患CRS，鼻息肉及过敏性鼻炎的鼻中隔偏曲患者18例，于鼻内镜手术中取得下鼻甲粘膜作为对照组。采用免疫荧光染色检测BRF2在CRSwNP组中的表达与定位;脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)刺激体外培养的人鼻粘膜上皮细胞后，采用免疫荧光检测BRF2在细胞中的表达及定位，western blot及实时荧光定量pcr检测BRF2和GRP78在细胞中的表达。
　　结果:
　　(1)组织免疫荧光结果显示，相对于对照组，BRF2在CRSwNP组中的表达显著上调，差异具有统计学意义(P=0.001)。此外，在CRSwNP组中BRF2在胞浆内分布明显多于对照组，差异有统计学意义（P=0.002）。(2)细胞免疫荧光结果显示:在正常培养的人鼻粘膜上皮细胞（对照组）中，BRF2主要表达于核内，在经LPS刺激后的人鼻粘膜上皮细胞（6h组除外）中，该蛋白的表达明显增多，差异具有统计学意义（P＜0.05），且在细胞浆中表达量（6h组除外）明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。(3)在体外培养的人鼻粘膜上皮细胞中，经LPS作用后，BRF2（6h组除外）及GRP78的蛋白相对表达量显著高于未加LPS刺激的对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）;BRF2及内质网应激标志物GRP78的mRNA（6h组除外）的相对表达量明显高于未加LPS的对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:
　　本实验证明了BRF2在CRSwNP息肉组织中表达上调且在胞浆中的分布明显增多;在体外，LPS刺激可诱导鼻粘膜上皮细胞中BRF2表达上调，内质网应激相关蛋白GRP78表达上升，内质网处于应激状态。故BRF2可能出核，介导内质网应激，从而参与了CRSwNP的发病过程。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

实验材料与方法

1．一般资料

2．实验方法

3 统计学分析

实验结果

1．BRF2在下鼻甲粘膜上皮组织与CRSwNP息肉组织中的表达

2．BRF2在体外培养的人鼻粘膜上皮细胞的表达

讨论

结论

附录

参考文献

炎症与内质网应激、氧化应激是相互关联的 综述

致谢

攻读硕士期间发表的论文