新型生物标记评估DCD捐献供肾质量和预测移植术后肾功能的分析

摘要

目前临床上常用血肌酐、尿素氮等传统指标来评估供肾质量和预测肾移植术后肾功能恢复情况，但是这些指标的特异性和稳定性较差。因此，找出一些具有高灵敏性、高特异性的可以有效指导供体选择和预测移植物后肾功能的生物标记物具有很高的临床应用价值。
　　有研究已经报道了一些生物标记物在供体器官功能评估方面的作用，如中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾脏损伤因子1(KIM-1)、金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)、尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(uNAG)等为代表的新型生物标记物可以评估肾脏功能、预测肾脏损伤，因为这些生物标记物可由肾脏或者大部分由肾脏分泌，且在肾脏损伤后这些生物标记物的尿液或者血液浓度变化及时，因此它们能及时反映肾小球和肾小管的损伤。
　　综上所述，本研究将分析供受体血液、尿液标本中的生物标记物浓度与传统临床指标血肌酐等之间的联系以及与生物标记物在供肾的穿刺组织标本中的表达量之间的联系，找出、归纳和总结生物标记物在评估心脏死亡器官捐献的供肾质量和预测移植术后肾功能的规律性的关系。
　　目的：
　　研究和评估供、受体的新型生物标记物与心脏死亡器官捐献的供肾质量和这些生物标记物与移植术后肾功能之间的关系。筛选出满足以下三个条件的标记物:1、能在潜在供者中筛选出合适供者;2、能较传统临床指标更灵敏、更特异性的评估供肾质量;3、能提前提示或预判移植肾功能的恢复情况。
　　方法：
　　1.伦理要求
　　2.研究对象
　　供体纳入标准:汉族、年龄＞14岁或＜65岁，无传染病病史，符合DCD捐献条件的供体。受体纳入标准:需要接受肾移植手术的终末期肾脏病的患者;受体排除标准:年龄＜18岁，诊断为肿瘤、肝炎等传染病的患者。共有27例供体和接受他们肾脏的54例受体纳入本次研究。
　　3.实验标本获取及检测方法
　　(1)供体入院后留取其在捐献当天捐献手术前(D0)的血清、尿液标本;受体留取移植手术前、手术后1天、3天、7天、14天的血清、尿液标本，血清、尿液标本收集后经过预处理和保存后以供分析;留取供肾移植术前的肾脏组织标本。
　　(2)ELISA定量分析:ELISA法定量分析供受体血清、尿液标本中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾脏损伤因子1(KIM-1)、金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)、尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(uNAG)的含量。
　　(3)移植术前留取的供肾活检组织行苏木精-伊红染色（H-E染色）染色和免疫组化测定:供肾活检组织H-E染色后根据Randhawa标准分级:免疫组化检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾脏损伤因子1(KIM-1)、金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP-2）、尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(uNAG)在供肾活检组织中的表达情况。
　　4.其他数据的收集
　　记录供受体的一般特征信息，比如性别、年龄、病史、体重(kg)、血肌酐、供体的死亡原因、供肾的冷缺血时间等基本信息。
　　5.实验分组与数据分析
　　(1)血清、尿液标本中生物标记物浓度
　　①根据供肾是否发生急性肾损伤将供体分为急性肾损伤组（AKI组）和非急性肾损伤组（非AKI组），比较两组血清、尿液标本中生物标记物含量差异。
　　②根据受体移植术后7天肌酐浓度将受体分为移植肾功能降低组（RGF组）和移植肾功能快速恢复组（IGF组），其所对应的供体也被分为RGF组和IGF组，分别分析供体两组之间和受体两组间的血清、尿液标本中生物标记物的含量差异，以及评估供、受体生物标记物与发生RGF之间的关系。以上两种分组如下图所示:
　　(2)分析生物标记物在供肾活检组织中的表达量差异情况。
　　6.统计学分析方法
　　结果：
　　1.血清、尿液标本中生物标记物浓度
　　(1)供体AKI组和非AKI组比较:AKI组的血TIMP-2、血KIM-1、尿TIMP-2和尿KIM-1浓度比非AKI组增高(P值分别为0.001、0.043、0.005、0.047)。
　　(2)供体RGF组与IGF组比较:RGF组的血NGAL、血TIMP-2比IGF组增高（P值分别为0.048、0.034）。
　　(3)RGF的受试者工作特征曲线（ROC曲线）:供体移植前（D0时）的血TIMP2+uNAG+Scr浓度曲线下面积为AOROC=0.871，P=004，单独的Scr浓度曲线下面积(AORUC=0.714，P=0.097)
　　(4)受体术后第三天(D3)的血TIMP-2浓度与受体术后第7天eGFR、肌酐密切相关;做出受体术后第三天(D3)的血TIMP-2浓度对RGF的预测价值ROC曲线（AUROC=0.99，95％CI0.97-1.00，P＜0.001）。
　　2.生物标记物在移植前获取的供肾活检组织中的表达差异:
　　共留有10个供肾活检组织标本，TIMP-2在10个活检组织中都有表达，依据半定量分析计分分析法（注:以染色强度和阳性细胞数的百分比综合计分，组织切片中胞质被染色为淡黄色至棕褐色者记为阳性细胞标志，染色强度与阳性细胞百分比的乘积记为统计总分，分为:0分为阴性，1-4分弱阳性，5-8分为中度阳性，9-12分为强阳性），结果如下:TIMP-2表达评分为0有6个，表达评分为1有2个，表达评分为2的有1个，表达评分为3有1个，在RGF组和IGF组中TIMP-2表达差异无统计学意义。
　　结论：
　　1.供体D0时的TIMP-2、KIM-1浓度能评估较好的评估供肾质量。
　　2.供体D0时的血TIMP-2、uNAG、血肌酐浓度能诊断受体是否发生RGF（移植肾功能降低）;血肌酐水平和供体发生RGF间的关系弱于血清TIMP-2和uNAG水平与RGF的关系，血清TIMP-2和uNAG能更好的预测RGF的发生。
　　3.受体移植术后第三天的血TIMP-2浓度能提前预测术后7天的移植肾功能，即能诊断移植肾是否会发生RGF。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料和方法

实验结果

讨论

结论

附图与附表

参考文献

综述

致谢

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