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摘要
缩略语表
第一章绪论
1．1．2 DNA同源重组工程原理
1．1．3 DNA同源重组工程的应用
1．2 SCN9A与Nav1．7
1．2．1 SCN9A与Nav1．7简介
1．2．2 SCN9A与神经性疼痛病
1．2．3以Nav1．7为靶点的镇痛药物的研究与开发
1．3人工核酸内切酶介导的基因编辑技术
1．3．1锌指核酸酶(ZFNs)
1．3．2转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)
1．3．3由RNA指导的Cas9核酸酶(CRISPR／Cas9)
1．4立题依据和意义
1．5技术路线
第二章人SCN9A基因的BAC缝合
2．1实验材料
2．1．1菌株和质粒
2．1．2培养基、抗生素和诱导剂
2．1．3重组引物及测序引物
2．1．4化学试剂
2．1．5仪器设备
2．2实验方法
2．2．2酶切鉴定
2．2．3聚合酶链式反应
2．2．4 DNA的苯酚／氯仿／异戊醇抽提与酒精沉淀
2．2．5大肠杆菌的电转方法
2．2．6在GB05-dir中进行线性DNA之间的重组
2．2．7在GB08-red中进行线性DNA和环形DNA之间的重组
2．3实验过程及结果分析
2．3．1 BAC A1 RP11-746P5的修饰
2．3．2 G856D和A1632E点突变
2．3．3 BAC b1 CH17-291A18的修饰
2．3．4 BAC缝合
2．3．5 BAC缝合后修饰
2．4讨论
第三章SCN9A人源化小鼠胚胎千细胞的构建
3．1实验材料
3．1．1细胞系和质粒
3．1．2培养基和抗生素
3．1．3检测引物
3．1．4化学试剂
3．1．5仪器设备
3．2实验方法
3．2．1脂质体转染
3．2．2单克隧的挑取
3．2．3细胞基因组DNA 96孔板提取方法
3．3实验过程及结果分析
3．4讨论
第四章Scn9α基因敲除小鼠胚胎干细胞的构建
4．1实验材料
4．1．1质粒
4．1．2重组引物及测序引物
4．2实验方法
4．2．1小鼠胚胎干细胞基因打靶的核转染方法
4．2．2细胞基因组DNA 24孔板提取方法
4．2．3 ExoCET技术
4．3实验过程及结果分析
4．3．1 gRNA表达质粒的构建
4．3．2基因打靶载体的构建
4．3．3基因打靶及基因型分析
4．4讨论
第五章全文总结与展望
附图
附表
参考文献
致谢
硕士研究生期间发表的学术论文
山东大学;
