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摘要
缩略符号说明
第一章绪论
1．1内皮功能与心血管系统综述
1．1．1 NO功能与氧化应激
1．1．2内皮功能紊乱与动脉粥样硬化
1．1．3 ox-LDL的促动脉粥样硬化效应
1．2基于生物质谱的蛋白组分析
1．2．1生物质谱仪
1．2．2质谱的碎裂方式
1．2．3基于质谱的蛋白组定量研究方法
1．2．4蛋白组的质谱分析策略
1．3翻译后修饰
1．3．1翻译后修饰的种类
1．3．2翻译后修饰的功能
1．3．3翻译后修饰的分析策略
1．4亚硝基化修饰
1．4．1亚硝基化的特点
1．4．2亚硝基化与去亚硝基化
1．4．3亚硝基化蛋白的功能
1．4．4亚硝基化的分析方法
1．5内皮糖萼
1．5．1糖萼的结构
1．5．2糖萼的功能
1．5．3糖胺聚糖的常用研究方法
1．5．4糖胺聚糖与蛋白的相互作用
1．6论文大纲
第二章ox-LDL刺激下内皮细胞的定量蛋白组学研究
2．1引言
2．2实验材料
2．2．1试剂与耗材
2．2．2主要仪器
2．2．3色谱柱
2．2．4缓冲液及流动相的配制
2．3实验方法
2．3．1内皮细胞培养
2．3．2细胞凋亡试验
2．3．3数据统计
2．3．4蛋白酶解和iTRAQ标记
2．3．5一维高pH反相色谱离线分离
2．3．6 nanoLC-MS／MS分析
2．3．7数据处理
2．4．1细胞凋亡
2．4．2氧化应激下内皮细胞的蛋白组
2．4．3差异蛋白的功能富集分析
2．4．4蛋白相互作用网络分析
2．5本章小结
第三章ox-LDL刺激下内皮细胞的亚硝基化修饰酶研究
3．1引言
3．2试剂与耗材
3．2．1试剂与耗材
3．2．2主要仪器
3．2．3缓冲液及流动相的配制
3．3实验方法
3．3．1内皮细胞培养
3．3．2 NO定量检测
3．3．4 Western blot
3．4结果与讨论
3．4．1 NO含量与eNOS表达量检测
3．4．2总亚硝基化蛋白水平检测
3．4．3 GSNOR表达量检测
3．5本章小结
第四章ox-LDL刺激下内皮细胞亚硝基化蛋白组的定量研究
4．1引言
4．2药品与试剂
4．2．1试剂与耗材
4．2．2主要仪器
4．2．3色谱柱
4．2．4缓冲液及流动相的配制
4．3实验方法
4．3．1内皮细胞培养
4．3．2蛋白提取和浓度测定
4．3．3蛋白酶解
4．3．4亚硝基化肽段的富集
4．3．5 iTRAQ标记
4．3．7数据处理
4．4结果与讨论
4．4．1亚硝基化位点的鉴定
4．4．2亚硝基化蛋白的相对定量
4．4．3亚硝基化蛋白的功能富集
4．4．4亚硝基化蛋白的相互作用网络
4．4．5亚硝基化肽的分析
4．5本章小结
第五章ox-LDL刺激下内皮细胞硫酸乙酰肝素的表征
5．1引言
5．2药品与试剂
5．2．1试剂与耗材
5．2．2主要仪器
5．2．3色谱柱
5．2．4缓冲液及流动相的配制
5．3实验方法
5．3．1内皮细胞培养
5．3．2荧光检测
5．3．3硫酸乙酰肝素的提取和纯化
5．3．4 LC-MRM MS分析
5．3．5电泳分析
5．4结果与讨论
5．4．1硫酸乙酰肝素的荧光检测
5．4．2硫酸乙酰肝素的结构表征和含量测定
5．4．3硫酸乙酰肝素的分子量表征
5．5本章小结
第六章ox-LDL刺激下内皮细胞硫酸乙酰肝素结合蛋白的研究
6．1引言
6．2药品与试剂
6．2．1试剂与耗材
6．2．2主要仪器
6．2．3缓冲液及流动相的配制
6．3实验方法
6．3．1蛋白组芯片
6．3．2 BLI测定
6．3．3免疫共定位
6．3．4细胞凋亡
6．4结果与讨论
6．4．1硫酸乙酰肝素结合蛋白的筛选
6．4．2硫酸乙酰肝素结合蛋白的验证
6．4．3关键硫酸乙酰肝素结合蛋白的筛选
6．4．5硫酸乙酰肝素对胎球蛋白内吞的影响
6．4．4脱硫酸肝素与胎球蛋白的结合
6．4．6非抗凝肝素的保护作用
6．5本章小结
全文总结
参考文献
致谢
攻读博士学位期间发表的学术论文及申请的专利
