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摘要
缩略词
第一章绪论
1．1微生物中天然产物挖掘的发展历程及现状
1．2海洋链霉菌
1．3微生物中天产物的挖掘方法
1．3．1概述
1．3．2原位激活
1．3．3异源表达
1．4 Red／ET技术在天然产物研究中的应用
1．4．1 Red／ET重组工程的简介
1．4．2 Red／ET重组工程的原理
1．4．3 Red／ET重组工程的发展与应用
1．5研究目的和意义
2．1菌株和质粒
2．2抗生素
2．3培养基
2．3常用试剂和主要仪器
2．3．1主要试剂(盒)
2．3．2主要仪器
2．4实验方法
2．4．1主要的技术路线
2．4．2基因簇的直接克隆和初步修饰
2．4．3启动子的添加
2．4．4基因簇BGC1中基因的敲除
2．4．5基因簇BGC21中基因的敲除与回补
2．4．6实时逆转录PCR
2．4．7接合转移
2．4．8链霉菌的发酵
2．4．9发酵产物的提取和检测
2．4．10目标产物的分离纯化和结构鉴定
第三章实验结果
3．1 Streptomyces sp．B59全基因组测序
3．2 OSMAC方法的初步探索
3．2．1抗菌活性产物的发现
3．2．2活性产物的分离
3．2．3新颖大环内酯类化合物B59-1的分离和结构鉴定
3．3 BGC1基因簇的异源表达
3．3．1 BGC1生物合成基因簇的生物学分析
3．3．2 BGC1的直接克隆和初步修饰
3．3．3在异源宿主中表达BGC1
3．3．4 BGC1异源表达产物的分离
3．3．5 BGC1基因的敲除
3．3．7活性测定
3．4 BGC2基因簇的异源表达
3．4．1 BGC2生物合成基因簇的生物学分析
3．4．2 BGC2基因簇的直接克隆和初步修饰
3．4．3异源表达激活BGC2
3．5 BGC3基因簇激活的失败
3．5．1 BGC3生物合成基因簇的生物学分析
3．5．2 BGC3基因簇的直接克隆和初步修饰
3．5．3 BGC3基因簇激活的尝试
3．6 BGC6基因簇的异源表达
3．6．1 BGC6生物合成基因簇的生物学分析
3．6．2 BGC6基因簇的直接克隆和初步修饰
3．6．3异源表达激活BGC6
3．6．4 BGC6产物的分离纯化
3．7 BGC21基因簇的异源表达
3．7．1 BGC21生物合成基因簇的生物学分析
3．7．2 BGC21的直接克隆和初步修饰
3．7．3异源表达激活BGC21
3．7．3产物的分离和结构鉴定
3．7．4合成途径中基因的单敲除
3．7．5 PKS基因的表达和产物的鉴定
3．7．6卤化酶的回补
3．7．7基因bgc21-2和bgc21-5的RT-qPCR检测
3．7．8 pks失活后，未卤化产物的添加
第四章讨论
4．1异源表达的相关讨论
4．2 OSMAC实验的讨论
4．3 BGC1合成途径的激活和产物的研究
4．4 BGC2基因簇产物的推测
4．5 BGC3基因簇激活失败的原因
4．6 BGC6的相关讨论
4．7 BGC21基因簇研究的相关结果讨论
第五章总结和展望
5．1总结
5．2展望
附录
参考文献
致谢
