4周低氧运动对营养肥胖型大鼠骨骼肌自噬相关因子时序性变化影响的研究

摘要

目的：
　　探讨在低氧条件下运动对营养肥胖型大鼠腓肠肌自噬相关因子P62、LC3、Beclin-1表达的影响以及低氧运动诱导骨骼肌细胞自噬发生的可能机制。
　　方法：
　　采用高脂饮食诱导SD大鼠建立营养肥胖型大鼠模型，随后选取建模成功大鼠随机分为：对照组（C）、低氧训练1周组（E1）、低氧训练2周组（E2）、低氧训练3周组（E3）和低氧训练4周组（E4），共5组，每组10只。低氧暴露模拟13.6％氧浓度（相当于3500m海拔氧含量），动物跑台进行训练，速度为20m.min-1,坡度为0，每天运动1h，周末休息2天，分别训练1周、2周、3周、4周，最后一次训练结束24h后将动物处死并采样，采用RT-PCR技术检测模型大鼠腓肠肌P62、LC3、Beclin-1 mRNA以及westent blot技术检测P62、LC3、Beclin-1蛋白在实验干预前后的变化情况。
　　结果：
　　E1、E2、E3组与C组相比Beclin-1 mRNA表达量显著升高（P＜0.05），E4组略有下降，Beclin-1蛋白表达量在前两周逐渐下降，与C组相比E2组下降程度显著（P＜0.05），后两周又逐渐增加，E4组比E2组明显升高（P＜0.01）；E1组P62 mRNA的相对表达量与C对照组相比增加明显（P＜0.05），E2组与E1组相比呈持续升高趋势（P＜0.05），E3组P62 mRNA的相对表达量非常显著低于E2组和E4组（P＜0.01）。E3组肥胖大鼠P62蛋白相对表达量与E2组相比显著升高；E2、E3组、E4组LC3 mRNA相对表达量均显著高于C组（P＜0.05），5组肥胖大鼠LC3蛋白中LC3II/LC3I比值变化均不明显。
　　结论:
　　（1）低氧运动能显著增加自噬相关基因的表达，在一定程度上促进自噬的发生，但是自噬基因的转录与自噬蛋白质的合成具有不同步性。（2）在低氧训练的前两周骨骼肌的自噬程度出现增加的趋势，但是随低氧运动时间的延长骨骼肌的自噬程度逐渐降低，可能是机体对低氧刺激逐渐适应的结果。

目录

声明

表1 中英文缩略语表

1选题依据

2文献综述

2.1细胞的自噬现象

2.1.1细胞自噬与分类

2.1.2细胞自噬机制

2.2自噬相关因子

2.3特殊环境对自噬的影响

2.3.1低氧与自噬

2.3.2运动与细胞自噬

3材料与方法

3.1实验动物

3.2实验方法与取材

3.2.1训练方案与分组

3.2.2取材

3.3 RT-PCR检测腓肠肌Beclin-1、P62和LC3 mRNA表达的测定

3.3.1指标的测定

3.3.2骨骼肌总RNA的提取

3.3.3 1%浓度琼脂糖凝胶测量骨骼肌中总RNA的完整性

3.3.4骨骼肌中总RNA纯度检验与浓度测定

3.3.5反转录生成cDNA（SYBR?Green分析法）

3.3.6引物的设计

3.3.7实时荧光定量PCR反应

3.4 Westent blot法检测腓肠肌Beclin-1、P62和LC3蛋白表达的测定

3.4.1实验试剂的准备

3.4.2组织样本总蛋白的提取

3.4.3 SDS-PAGE凝胶电泳

3.5实验试剂与仪器

3.5.1实验试剂

3.5.2实验仪器

3.6数据处理

4实验结果

4.1 各组大鼠骨骼肌相关自噬因子的变化

4.1.1 各组大鼠Beclin-1相对表达量的时序性变化

4.1.2 各组大鼠P62相对表达量的时序性变化

4.1.3各组大鼠 LC3相对表达量的时序性变化

5分析讨论

5.1低氧训练对自噬相关因子Beclin-1表达的影响

5.2低氧训练对自噬相关因子P62表达的影响

5.3低氧训练对自噬相关因子LC3表达的影响

6结论

参考文献

致谢