南极冰藻DNA光修复酶脂质体的研究

摘要

南极冰藻DNA光修复酶是从南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L体内发现的一种酶类，它可以修复紫外线损伤的DNA使其恢复正常空间结构。本文以从南极冰藻Chlamydomonas sp.ICE-L体内发现的 DNA光修复酶为目标药物，制备以脂质体形式的冻干制剂，从而使其发挥日用防晒品的作用。
　　1.进行了南极冰藻DNA光修复酶的提取、分离和纯化工艺的研究。研究表明，得到有效剂量蛋白的工艺条件为DNA光修复酶工程菌5000rpm离心20min，冰浴中超声破碎20min。对诱导表达和纯化后的蛋白进行SDS-PAGE检测，在66KDa附近有目的蛋白条带。加入甘露醇对DNA光修复酶的活性有保护作用。
　　2.对南极冰藻DNA光修复酶脂质体制备工艺进行了探讨。结果表明，以逆向蒸发法为脂质体的制备方法，固态大豆卵磷脂和胆固醇为膜材，氯仿-乙醚的混合溶剂为有机相。以包封率（％）为指标，经单因素考察和正交试验确定了脂质体的制备工艺的最佳处方：膜材比为3:1，油相与水相比为4:1，药脂比为1:10，超声时间6min，水化温度为30℃，按最优处方制得的脂质体包封率为44.13±2.90%。
　　3.探讨了脂质体的冻干工艺，以外观形态、包封率、粒径、再分散性为指标，得到最佳制备工艺条件：脂质体在-80℃预冻12h，真空冷冻干燥24h，海藻糖为冻干保护剂，所制得的冻干脂质体包封率为42.89±1.44%。冻干脂质体在4℃保存30d后粒径和包封率无明显变化且酶活稳定。
　　4.建立以脂质体的外观形态、包封率、粒径和Zeta电位为指标的质量标准检测体系。所得DNA光修复酶脂质体形态呈圆形或椭圆形球体，脂质体及其冻干制剂粒径为490.9±2.3nm和591.3±1.6nm，Zeta电位在-30mV～-60mV。采用紫外分析法对脂质体制剂进行含量测定，方法学考察表明紫外分析法专属性、精密度、稳定性和重复性良好。脂质体冻干制剂的回收率在98%～102%，RSD小于2%，证明该方法准确可靠。
　　本课题完成了南极冰藻DNA光修复酶的脂质体冻干制剂的研制，制备方法简便可行，冻干制剂的质量标准符合2015版中国药典要求，为DNA光修复酶在日用防晒中的应用提供了可靠的理论依据。

目录

前言

第一章 综述

1.1 南极冰藻DNA光修复的来源

1.2 南极冰藻DNA光修复酶的应用前景

1.3 脂质体的简介

1.4 脂质体的发展现状及趋势

1.5 本论文研究的目的和意义

第二章 DNA光修复酶的提取、分离和纯化工艺研究

2.1 材料与仪器

2.2 实验内容

2.3 结果与分析

2.4 本章小结

第三章 南极冰藻DNA光修复酶脂质体及其冻干工艺的研究

3.1仪器和材料

3.2实验内容

3.3 结果与分析

3.4 本章小结

第四章 DNA光修酶光修复酶制剂质量标准的建立

4.1 仪器和材料

4.2 实验内容

4.3 实验结果与分析

4.3本章小结

结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文

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