突变人CD59基因在真核细胞中的表达活性研究

摘要

目的 构建突变人CD59的真核表达系统,获得高效表达突变人CD59的CHO细胞株,并进行糖化和非糖化突变人CD59蛋白功能的检测,探讨CD59作为补体攻膜复合体抑制物在糖尿病血管并发症病理机制中的重要作用,为人类糖尿病血管增殖症的发病机理提供依据.方法突变人CD59的真核细胞表达系统的建立:将含有突变人CD59的重组PALTER-MAX质粒与PcDNA运用阳离子脂质体介导法共转染入CHO细胞;用新霉素类似物(G418)筛选出阳性克隆,并用流式细胞术进一步筛选出高效表达克隆,建立稳定高效表达CHO细胞株.应用免疫组化方法、免疫荧光技术进一步鉴定稳定高效表达CHO细胞株;裂解细胞,应用SDS-PAGE凝胶电泳技术、免疫印迹技术、固相酶联免疫吸附试验验证稳定高效表达阳性细胞CD59的表达;高糖培养稳定高效表达阳性细胞,并运用BCECF染料释放试验研究糖化和非糖化突变人CD59的抗补体活性.结论1.构建突变人CD59 HM1、HM2的真核细胞表达系统,获得稳定高效表达突变人CD59的CHO细胞株.2.初步证实了突变人CD59的抗补体活性功能及糖化后抗补体活性的功能下降.证实了CD59作为一种补体溶解抑制因子在抗补体作用的过程中起着重要的作用;高糖使CD59糖化导致活性下降,可能导致或加速糖尿病血管并发症的发生,为糖尿病血管增殖症病理机制提供实验依据.

目录

文摘

英文文摘

引 言

材 料

方 法

结 果

讨论

小 结

附 录

参考文献

致 谢

文献综述 糖尿病血管增殖病理机制与人CD59相关性的研究进展

摘要

一 糖尿病血管增殖症病理机制

二 非酶糖化学说

三 CD59

四 补体

五 CD59糖基化

六 人类尿中存在糖化CD59，证实体内存在糖化CD59的过程

七 CD59转基因动物的功能表达

八 结语及展望

参考文献