毒蕈碱受体在人角膜缘和角膜、结膜表达的研究

摘要

目的:研究人角膜缘和角膜、结膜是否表达毒蕈碱受体1-5亚型(m1-5).材料与方法:从人角膜缘组织分离上皮细胞并培养至第1-2代.RT-PCR分析培养人角膜缘上皮细胞中角蛋白3、12 mRNA的表达.免疫荧光染色研究增殖细胞核抗原(PCNA)、p63和角膜上皮分化标志-角蛋白3、12(K3、K12)、外皮蛋白、连接蛋白43在培养人角膜缘上皮细胞中的表达.用植块法培养角膜基质成纤维细胞.从培养的角膜缘上皮细胞和角膜基质成纤维细胞中提取总RNA和蛋白质,行毒蕈碱受体1-5亚型RT-PCR和Western Blot.免疫荧光染色研究m1-5在人角膜缘和角膜组织和培养细胞的分布.从人结膜组织分离上皮细胞和成纤维细胞并培养至第1-2代,提取培养细胞的总RNA和蛋白质,行毒蕈碱受体1-5亚型RT-PCR和Western Blot.免疫荧光染色研究m1-5在人结膜组织和培养细胞的分布.Brdu酶联免疫吸附试验检测毒蕈碱受体激动剂carbachol对结膜成纤维细胞增殖的影响.结论:人角膜缘上皮细胞在丝裂霉素C处理的3T3饲养层和SHEM的培养环境下表现出类似角膜缘上皮层基底细胞的特点.毒蕈碱受体1-5亚型广泛存在于角膜缘和角膜、结膜中,毒蕈碱受体激动剂carbachol促进结膜成纤维细胞的增殖,提示该G蛋白受体对细胞功能有调节作用.

目录

摘要

ABSTRACT

前言

第一部分毒蕈碱受体在人角膜缘和角膜表达的研究

材料与方法

一、人角膜缘上皮细胞和角膜基质成纤维细胞的培养

二、毒蕈碱受体在培养人角膜缘上皮细胞和角膜基质成纤维细胞中表达的检测

三、毒蕈碱受体在人角膜缘和角膜组织中的表达

结果

一、培养人角膜缘上皮细胞和角膜基质成纤维细胞的生物学特点

二、毒蕈碱受体在培养人角膜缘上皮细胞和角膜基质成纤维细胞中的表达

（三）毒蕈碱受体在人角膜缘和角膜组织的表达

讨论

第二部分毒蕈碱受体在人结膜表达的研究

材料与方法

一、人结膜上皮细胞和基质成纤维细胞的培养

二、毒蕈碱受体在培养人结膜上皮细胞和成纤维细胞中表达的检测

三、毒蕈碱受体在人结膜组织中表达的检测

四、毒蕈碱受体激动剂carbachol对结膜成纤维细胞增殖影响的酶联免疫吸

结果

一、培养人结膜上皮细胞和成纤维细胞的生物学特性

二、毒蕈碱受体在培养人结膜上皮细胞和成纤维细胞中的表达

三、毒蕈碱受体在人结膜组织中的表达

四、毒蕈碱受体激动剂carbachol对结膜成纤维细胞增殖的影响

讨论

总结

结论

参考文献

附图

在学期间的研究成果及发表的学术论文

致谢