脱敏组方抗Ⅰ型和Ⅳ型变态反应的实验研究

摘要

目的:观察中药脱敏组方对Ⅰ型和Ⅳ型变态反应的影响，探讨其抗变态反应的作用机制，为脱敏组方的临床应用提供理论依据。 方法:体外实验：1.脱敏组方对组胺兴奋离体回肠的影响。实验分五组：①脱敏组方对正常肠肌影响组：描计2min肠肌正常运动后，加入脱敏组方溶液，使平滑肌槽内药品的浓度达8mg/ml，稳定后，描计2min肠肌运动曲线。②组胺兴奋离体回肠组：描计正常肠肌运动后，加入组胺溶液，使槽内组胺浓度达0.01μg/ml，稳定后，描计2min运动曲线。③脱敏组方低剂量组④脱敏组方高剂量组⑤阳性对照药物扑尔敏组。后三组在描记组胺兴奋回肠运动曲线2min后，分别加入脱敏组方高、低剂量及扑尔敏，使各组药物浓度达4mg/ml、8mg/ml、0.01mg/ml，分别描计稳定后的运动曲线。根据加入不同药物后描计的回肠收缩幅度的大小，评价脱敏组方对组胺兴奋离体回肠的影响。2.脱敏组方稳定肥大细胞膜的作用。将纯化好的肥大细胞分为五组，分别加入阳性对照药物色苷酸钠(2％*0.1ml)，脱敏组方高剂量(2.8g/ml*0.1ml)，脱敏组方低剂量(1.4g/ml*O.1ml)，模型和正常对照组不加药物，37℃孵育10min后，前四支试管中加入compound48/80对肥大细胞膜进行攻击，然后进行以下测定：①荧光分光光度计测定每组试管组胺释放量，评定各组药物对compotmd48/80引起的肥大细胞组胺释放的影响。②甲苯胺蓝染色，从形态学方面观察脱敏组方对肥大细胞脱颗粒的影响。③免疫组化法检测脱敏组方对compotmd48/80攻击后肥大细胞中5-HT表达的影响，对各组肥大细胞5-HT含量进行定量分析。通过以上三个方面观察脱敏组方稳定肥大细胞膜、抑制肥大细胞脱颗粒及释放炎症介质的作用。 体内试验：观察脱敏组方抗Ⅳ型变态反应的作用。1.脱敏组方对氯化钴(PC)诱导的小鼠接触性皮炎的影响。小鼠分为阳性药物(强地松)、脱敏组方高剂量(2.8g/ml)、脱敏组方低剂量(1.4g/ml)及模型组四组，各组小鼠用氯化钴无水乙醇致敏，致敏第5天以含氯化钴的橄榄油进行耳部攻击，攻击同时及其后16小时给予药物灌胃，24小时后沿同一部位剪下小鼠耳廓进行H-E染色，以接目测微器进行耳廓厚度测量，通过小鼠耳廓的肿胀程度来观察脱敏组方的抗迟发型变态反应作用。2.脱敏组方对绵羊红细胞(SRBC)所致小鼠足趾肿胀的影响。分组与PC诱导接触性皮炎实验组相同，小鼠颈背部皮下注射SRBC致敏，第5天时足趾部同样皮下注射SRBC，攻击同时及其后16小时给予药物灌胃，24小时后将鼠爪沿踝关节处剪下，测量左右鼠爪重量，重量差为肿胀程度，来观察脱敏组方的抗迟发型变态反应作用。 结果:体外实验：脱敏组方可明显抑制速发型变态反应：脱敏组方1.4g/ml、2.8g/ml均可抑制组胺引起的豚鼠回肠的兴奋性收缩，其抑制率分别为81.39％及92.34％，与模型组相比差异有显著性(P＜O.01)，脱敏组方对正常肠肌的收缩没有显著性的抑制作用(P＞0.05)。脱敏组方1.4g/ml、2.8g/ml均可明显减少compoLmd48/80引起的大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒，其抑制率为73.61％及81.73％，与模型组相比差异有显著性(P＜O.01)。对肥大细胞释放组胺的抑制率分别为63.2％及81.2％，与模型组相比有显著性差异(P＜0.01)。光镜下观察：用药后肥大细胞形态规则、脱颗粒细胞数明显减少，5-HT表达积分增高。 体内实验：脱敏组方可明显抑制迟发型变态反应：(1)对PC诱导的小鼠耳廓接触性皮炎实验中，脱敏组方低剂量对肿胀的抑制率为54.25％，高剂量的抑制率为73.86％，与模型组相比有显著性差异(P＜O.01)．(2)对SRBC诱导的小鼠足趾肿胀的实验中，脱敏组方1.4g/ml对肿胀的抑制率为53.07％，2.8g/ml的抑制率为78.37％，与模型组相比有显著性差异(P＜0.01)。 结论:中药脱敏组方具有较好的抗变态反应作用，稳定肥大细胞膜、抑制肥大细胞脱颗粒、减少组胺、5-HT等炎症介质的释放及竞争性结合H1受体等是脱敏组方发挥抗Ⅰ型变态反应的主要作用机制之一。抑制抗原攻击后趋化因子、IFN-γ、TNF-β、IL-2、IL-3和GM-CSF等淋巴因子的释放，对抗这些因子的致炎作用可能为其抗Ⅳ型变态反应的作用机制之一。

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结果

附图

讨论

结论

参考文献

致谢

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