靶向HPV18E6基因siRNA对Hela细胞p21、VEGF、Bax和Bcl-2基因的影响

摘要

目的：研究针对人乳头瘤病毒18型E6基因的特异性小干扰RNA(siRNA)对人宫颈癌细胞增殖相关基因p21、VEGF、Bax和Bcl-2的影响。 方法：利用特异性siRNA脂质体法瞬时转染Hela细胞，采用半定量RT-PCR检测Hela细胞中p21、血管内皮生长因子(VEGF)、Bax和Bcl-2mRNA的变化，采用免疫组化的方法检测Hela细胞中p21和VEGF蛋白的变化。 结果：RT-PCR检测结果显示转染前p21 mRNA的表达水平为0.86±0.02，转染后24、48、72h，其表达水平分别为1.06±0.02、1.66±0.03、1.24±0.01;转染前VEGFmRNA的表达水平为1.62±0.03，转染后24、48、72h，其表达水平分别为1.47±0.06、1.31±0.03、1.35±0.13；转染前BaxmRNA的表达水平为0.94±0.02，转染后24、48、72h，其表达水平分别为1.46±0.03、2.42±0.03、1.37±0.04；转染前Bcl-2mRNA的表达水平为1.57±0.04，转染后24、48、72h，其表达水平分别为1.23±0.02、1.10±0.02、0.89±0.02；转染后各时间点p21，VEGF,Bax和Bcl-2mRNA的表达水平分别与其转染前比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。转染后24、48、72hp21和BaxmRNA的表达与转染前比较均有升高；转染后24、48、72hVEGF和Bcl-2mRNA的表达与转染前比较均有降低。免疫组化检测显示转染前p21蛋白的表达水平为0.26±0.02，转染后48、72h，其表达水平分别为0.42±0.03、0.48±0.03；转染前VEGF蛋白的表达水平为0.43±0.02，转染后48、72h，其表达水平分别为0.36±0.02、0.32±0.03；转染后各时间点p21，VEGF蛋白的表达水平分别与其转染前比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论：HPV18E6siRNA可特异有效的干扰宫颈癌Hela细胞中E6基因的表达，同时上调p21和Bax基因的表达，降低VEGF和Bcl-2基因的表达，从而抑制细胞增殖。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章材料和方法

1.1材料

1.1.1主要实验设备

1.1.2主要试剂和耗材

1.2方法

1.2.1试剂配置

1.2.2细胞复苏

1.2.3细胞传代培养

1.2.4细胞冻存

1.2.5 siRNA合成

1.2.6细胞转染

1.2.7 RT-PCR检测mRNA表达的程序

1.2.8细胞爬片及免疫组化程序

1.2.9统计学方法

第二章结果

2.1HPV18E6siRNA对Hela细胞E6、p21、VEGF、Bax和Bcl-2mRNA表达的影响

2.2 HPV18E6siRNA对Hela细胞p21和VEGF蛋白表达的影响

第三章讨论

结论

参考文献

综述 RNA干扰及其在肿瘤研究中的进展

攻读学位期间的研究成果

附录 缩略词表

致谢