Toll样受体2、4mRNA在家兔肺缺血再灌注损伤的定量表达及其意义

摘要

目的：观察Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2、4在家兔缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury，IRI)肺组织中的表达，分析其与肺IRI的相关性。 方法：通过夹闭家兔左肺门，建立肺IRI模型。分别于开胸后，夹闭肺门60min后再灌注之前，再灌注之后30min、1h、2h、4h、6h，采集肺组织样本。采用实时荧光定量PCR的方法检测缺血再灌注后不同时间点肺组织中TLR2、4mRNA的表达变化。 结果：①开胸后与缺血后再灌注之前，TLR2、4mRNA的表达无明显统计学差异。②肺组织缺血再灌注后，TLR2、4mRNA的表达同正常组相比均有着明显的统计学差异( F=26.143，P<0.01； F=3.263，P<0.01)。③与正常肺组织相比再灌注后0、30min、1h，TLR2、4mRNA的表达量开始增加，但均无统计学差异(P>0.05)；2h时TLR2mRNA表达明显升高，差异显著(t=5.584，P<0.01)，4h时TLR4mRNA的表达明显升高出现统计差异(t=2.803，P=0.011)； TLR2的表达在再灌注2h时明显高于1h(t=3.854，P=0.O01)，再灌注6h时明显高于4h(t=3.229，P=0.004); TLR4的表达于再灌注6h时明显高于1h时(t=5.397，P<0.01)，而再灌注6h与4h间无差异(t=1.187，P=0.25)。 结论：TLR2、4 mRNA表达的上调与家兔肺IRI密切相关。通过抑制TLR2与TLR4的表达防治供肺IRI，可能为减轻IRI、提高肺移植疗效的有效方法。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章材料与方法

1.1研究对象

1.2主要仪器和耗材

1.3试剂及引物

1.4试验方法

1.4.1建立动物模型

1.4.2标本总mRNA的提取及测定

1.4.3逆转录合成互补DNA(cDNA)

1.4.4 PCR扩增产物凝胶电泳

1.4.5实时荧光定量PCR反应

1.5统计学分析

第二章结果

2.1动物模型成功组建

2.2实时荧光定量PCR动力曲线及TLR2、TLR4 mRNA及GAPDH mRNA的表达

2.3 TLR2在肺组织缺血再灌注后的表达

2.4 TLR4在肺组织缺血再灌注后的表达

第三章讨论

3.1肺缺血再灌注损伤动物模型的建立

3.2 TLR2、TLR4的结构及其生物学功能

3.3缺血再灌注后肺组织中TLR2、TLR4mRNA的表达及其临床意义

3.4 TLR2、TLR4基因给缺血再灌注的治疗带来的新提示

第四章结论

参考文献

综述 TOLL样受体与缺血再灌注损伤的研究进展

附图

攻读学位期间的研究成果

致谢