HIF-1α、SOCS-3、Bax在心脏性猝死心肌中的表达和甲醛固定石蜡包埋尸检组织中提取DNA的研究

摘要

本文对HIF--1α、SOCS--3、Bax在心脏性猝死心肌中的表达和甲醛固定石蜡包埋尸检组织中提取DNA进行了研究。本研究分为两个部分：
　　 第一部分：HIF-1α、SOCS-3、Bax在心脏性猝死心肌中的表达。
　　 目的：检测HIF-1α、SOCS-3、Bax在心脏性猝死者心肌中的表达及其与心脏性猝死的关系，并探讨HIF-1α、Bax相关性，进而为法医学鉴定心脏性猝死提供客观依据。
　　 方法：选取25例心脏性猝死者为实验组，25例非心脏性猝死者为对照组。应用免疫组织化学方法检测HIF-1α、SOCS-3、Bax在心肌中的表达。
　　 结果：⑴常规HE染色：在心脏性猝死组中冠心病猝死者20例均可见心肌纤维断裂，心肌间质水肿，间质内见少量出血及淋巴细胞浸润，心肌间质纤维结缔组织增多，部分心肌细胞肥大并脂肪浸润，嗜伊红性增强，部分心肌细胞灶性变性、坏死，细胞轻度水肿，部分心肌细胞核轻度增大，并见畸形核，染色质疏松。冠状动脉左前降支、左旋支、右冠状动脉均见内膜增厚，管腔狭窄程度均>50％，部分管腔闭塞，部分管腔血栓形成。⑵心脏性猝死组每例心肌细胞中可见HIF-1α阳性表达，位于细胞浆中；阴性对照组仅有3例心肌细胞中可见HIF-1α阳性表达，余为阴性；心脏性猝死者心肌HIF-1α的表达明显高于对照组(Uc=6.083，P<0.01)。⑶心脏性猝死组中有22例心肌细胞中可见SOCS-3阳性表达，位于细胞浆中；阴性对照组仅有2例心肌细胞细胞可见阳性表达，余为阴性；心脏性猝死者心肌SOCS-3的表达明显高于对照组(Uc=5.8306，P<0.01)。⑷心脏性猝死组每例心肌细胞中可见Bax阳性表达，位于细胞浆中；阴性对照组仅有3例心肌细胞中可见Bax阳性表达，余为阴性；心脏性猝死者心肌Bax蛋白的表达明显高于对照组(Uc=5.573，P<0.01)。⑹在心脏性猝死心肌组织中，HIF-1α表达与Bax表达呈正相关(rs=0.736，P<0.01)。
　　 结论：①HIF-1α是反映心肌缺氧、缺血的非常敏感的指标，心脏性猝死患者心肌中HIF-1α的表达在急性心肌缺血早期显著增加。HIF-1α可作为一个早期心肌缺血的敏感的辅助诊断指标，并用于急性心肌缺血缺氧性死亡和其他原因(例如窒息)缺氧造成的死亡的鉴别。②心脏性猝死患者心肌中SOCS-3的表达在急性心肌缺血早期显著增加，提示它可能参与了心脏性猝死的发病机制，可能成为诊断心脏性猝死的早期、快速、灵敏的病理形态学辅助指标。③Bax在心脏性猝死患者心肌中有阳性表达，表明在心脏性猝死的心肌缺血中有凋亡调控机制参与。Bax的表达是心肌缺血的早期表现，可能成为诊断心脏性猝死灵敏、可靠的辅助诊断指标。④HIF-1α与Bax表达的增高与心脏性猝死的发生可能有一定的相关性，二者可能在心脏性猝死的病理变化过程中起协同作用，共同参与调控心肌细胞的凋亡。HIF-1α可能调控Bax，进而促进心肌细胞凋亡。
　　 第二部分：甲醛固定石蜡包埋尸检组织中提取DNA的研究。
　　 目的：比较甲醛固定石蜡包埋尸检组织中3种提取DNA的方法对DNA质量的影响，寻找一种操作简便、污染较少、经济实用的石蜡包埋尸检组织中提取DNA的方法。
　　 方法：取尸检存档的经甲醛固定石蜡包埋的心肌组织10例，分别以二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、试剂盒提取DNA法提取其DNA，然后进行电泳分析、紫外分光光度计测定A260/A280比值及PCR扩增。
　　 结果：二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法提取效率相同。改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法抽提DNA法、二甲苯脱蜡-酚氯仿法分别与试剂盒法所提取DNA的A260/A280值相比较，差异有显著性意义(P<0.01)。以改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所得DNA为模板，扩增的目的条带亮度与阳性对照相当。
　　 结论：结果证实改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法简便有效，所用试剂价格低廉，是一种经济实用的甲醛固定石蜡包埋尸检组织DNA提取方法。