7,8-二羟基黄酮对6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究

摘要

为研究7,8-二羟基黄酮(7,8-Dihydroxyflavone,7,8-DHF)对抗6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine,6-OHDA)毒性作用的分子机制,本研究应用6-OHDA诱导PC12细胞损伤,采用MTT法,观察7,8-DHF对PC12细胞的保护作用并用酪氨酸激酶(tyrosinekinaseB,TrKB)受体阻断剂ANA-12、K252a和磷脂酰肌醇3位羟基激酶(phosphatidylinositol-3kinase,PI3K)抑制剂LY294002对PC12细胞保护作用的阻断效应。并采用Hoechst33258染色、flowcytometry、RT-PCR、酶标法等多种实验方法,观察PCI2细胞的凋亡,TrKB受体的表达和7,8-DHF的自身抗氧化性等来探讨7,8-DHF对PC12细胞的保护作用机制。实验结果如下:
　　 1、6-OHDA可剂量依赖式降低PC12细胞的存活率(P＜0.001);7,8-DHF可减弱6-OHDA对PC12细胞的毒性作用(P＜0.001),并且7,8-DHF在25μM浓度时保护作用最明显。
　　 2、7,8-DHF对抗6-OHDA的毒性作用可以被PI3K抑制剂LY294002阻断(P＜0.001)。
　　 3、6-OHDA可明显导致PC12细胞的凋亡(P＜0.001),而7,8-DHF可明显降低PC12细胞的凋亡率(P＜0.001)。
　　 4、6-OHDA可明显降低PC12细胞的线粒体膜电位(P＜0.01),而7,8-DHF可明显逆转上述改变(P＜0.01)。
　　 5、6-OHDA可以明显升高细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量(P＜0.05),而7,8-DHF预保护可以抑制6-OHDA诱导的MDA升高(P＜0.05)。
　　 6、7,8-DHF可以明显增加超氧化物歧化酶(SOD)的活性(P＜0.01),而经6-OHDA处理的细胞SOD没有明显变化(P＞0.05)。以上结果表明7,8-DHF可明显对抗6-OHDA对PC12细胞的损伤,其机制可能与7,8-DHF抑制细胞凋亡,激活PI3K/Akt信号通路以及其自身的抗氧化性有关。本研究不仅为7,8-DHF的神经保护作用机制提供了进一步的实验依据,而且为进一步开发为可用于临床防治帕金森病的新药提供实验依据。