重组pEGFP-N1-CD146表达载体的构建及其对MDA-MB-231细胞侵袭、凋亡的影响

摘要

目的:构建人类CD146基因的表达载体,研究其对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞侵袭、凋亡的影响。
　　 方法:采用分子生物学方法构建人类CD146基因的表达载体,利用脂质体Lipofectamine2000转染到乳腺癌细胞MDA-MB-231,于荧光显微镜下评价转染效果,利用RT-PCR、Westernblot分别检测基因CD146在mRNA、蛋白水平上的表达效果。采用MTT法检测细胞在体外增殖的能力;流式细胞仪法FCM检测细胞的周期分布及凋亡水平的变化情况;Transwell实验观察细胞侵袭能力改变。
　　 结果:酶切、测序结果均表明pEGFP-N1-CD146载体构建成功;RT-PCR、Westernblot结果显示,与对照组相比,转染细胞后,实验组CD146mRNA和蛋白的水平表达均有增高(P＜0.05);增殖实验结果显示转染后实验组细胞增值能力较对照组细胞增高(P＜0.05);流式结果表明,与对照组相比,pEGFP-N1-CD146实验组细胞凋亡率降低(P＜0.05);同时,实验组细胞侵袭能力较对照组细胞明显增强(P＜0.05)。
　　 结论:CD146可能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞在体外的增殖能力,同时抑制细胞凋亡的发生,并促进细胞体外侵袭能力。