趋化因子CXCL12及其受体CXCR4对子宫内膜癌细胞株生物学行为的调控

摘要

目的:本研究通过应用外源性趋化因子CXCL12及其受体CXCR4拮抗剂AMD3100调控子宫内膜癌中CXCL12/CXCR4生物学轴，并利用RNA干扰技术下调CXCR4基因的表达，探讨其对子宫内膜癌细胞系生物学特性的影响。
　　 方法:①通过RT-PCR及western blot检测人子宫内膜癌细胞株中趋化因子受体CXCR4的表达，ELISA法检测Ishikawa细胞在不同培养时间上清液中CXCL12的分泌水平;
　　 ②通过MTT法及Transwell小室检测外源性CXCL12及AMD3100对Ishikawa细胞增殖、迁移及侵袭的影响;
　　 ③针对人CXCR4基因设计合成靶向特异性小分子干扰RNA，利用Lipofectamine2000脂质体转染剂转染至人子宫内膜癌Ishikawa细胞株，应用RT-PCR及western blot检测干扰效果;
　　 ④通过RT-PCR和western blot分析Ishikawa细胞株沉默CXCR4mRNA基因表达前后CXCR4在mRNA及蛋白水平表达变化，MTT法及Tran swell侵袭实验观察转染后细胞株增殖及趋化、侵袭能力的变化，流式细胞仪检查Ishikawa细胞株细胞周期和细胞凋亡水平变化。
　　 结果:①Ishikawa和HEC-1-A细胞均见CXCR4mRNA表达，而未见CXCL12表达，Ishikawa细胞可持续分泌CXCL12;
　　 ②外源性CXCL12促进Ishikawa细胞的增殖、迁移及侵袭，AMD3100可抑制CXCL12的促增殖、迁移及侵袭作用;
　　 ③针对CXCR4基因序列设计特异性小分子干扰RNA转染Ishikawa细胞株后，CXCR4基因的mRNA及蛋白表达量受到明显抑制，而空白组和对照组比较CXCR4基因水平无明显改变;
　　 ④在MTT及Transwell趋化侵袭实验中，转染小分子干扰RNA的细胞株增殖能力和趋化侵袭能力明显降低，流式细胞仪检测观察子宫内膜癌Ishikawa细胞周期出现S期阻滞，细胞凋亡率明显升高。
　　 结论:CXCL12/CXCR4生物轴促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的侵袭、转移及增殖作用;可能在子宫内膜癌的发生、发展和转移中发挥调控作用，阻断CXCR4可望成为子宫内膜癌治疗的新靶点。

目录

摘要

引言

第一章 趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在子宫内膜癌细胞系中的表达

1．1 实验材料

1．2 实验方法与步骤

1．3 统计学方法

1．4 结果

1．5 讨论

第二章 rhCXCL12及AMD3100对子宫内膜癌细胞系生物学功能的影响

2．1 实验材料

2．2 实验方法与步骤

2．3 统计学处理

2．4 实验结果

2．5 讨论

第三章 应用小分子RNA下调子宫内膜癌细胞系CXCR4的表达

3．1 实验材料

3．2 实验方法与步骤

3．3 统计学方法

3．4 结果

3．5 讨论

第四章 siRNA下调CXCR4后对子宫内膜癌细胞系的生物学功能影响

4．1 实验材料

4．2 实验方法与步骤

4．3 统计学处理

4．4 实验结果

4．5 讨论

第五章 结论

参考文献

综述

攻读学位期间的研究成果

附录

致谢

声明