(1,3)-β-D-葡聚糖检测评价药物治疗真菌性角膜溃汤疗效的实验研究

摘要

目的:建立兔感染茄病镰刀菌的真菌性角膜炎模型，监测模型眼不同时期泪液中(1，3)-β-D-葡聚糖的浓度变化，结合病变角膜组织中菌丝负荷及角膜溃疡临床评分进行分析，讨论(1，3)-β-D-葡聚糖检测评价真菌性角膜炎动物模型的可行性;通过药物治疗真菌性角膜炎动物模型，观察(1，3)-β-D-葡聚糖在真菌性角膜炎愈合过程中的浓度变化，进一步讨论(1，3)-β-D-葡聚糖评价药物治疗真菌性角膜炎疗效的应用，为探索一种真菌性角膜炎无创筛查和定量评价手段提供理论依据。
　　 方法:1.新西兰大耳白兔32只，随机选取16只为实验组，16只为阴性对照组。实验组采用角膜划痕法接种标准茄病镰刀菌株，制作真菌性角膜炎动物模型，阴性对照组接种生理盐水。均为右眼接种，左眼为正常对照组。每日行裂隙灯显微镜检查，于病程第3、7、15、21天进行临床评分，并分别收集三组泪液10μL行(1，3)-β-D-葡聚糖浓度检测。分别于上述各时间点随机选取实验组4只、阴性对照组4只经耳缘静脉栓塞处死后，留取角膜组织行组织病理学检查。观察病情进展情况。
　　 2.新西兰大耳白兔42只，按第一部分的方法，接种茄病镰刀菌，均为右眼接种。从42只兔真菌性角膜炎模中挑选临床评分接近的36只进行实验，随机分为治疗组18只、对照组18只。治疗组自成模后第1天即予5％那他霉素滴眼液点眼，对照组不予干预。分别于治疗前，治疗第3、5、10、15、21天收集患眼泪液行(1，3)-β-D-葡聚糖浓度检测，并于上述相同时间点随机选取治疗组3只、对照组3只处死后留取角膜组织，以角膜溃疡为中心分作两份，一份行组织病理学检查，一份置于经高压消毒的EP管中用于MMP-9蛋白Western-blot检测。观察抗真菌药物治疗疗效。
　　 结果:1.兔感染茄病镰刀菌性角膜炎模型建立成功，成功率100％。病程第3、7、15、21天，实验组泪液中(1，3)-β-D-葡聚糖浓度分别为(656.32±97.63) pg/mL、(858.29±96.26)pg/mL、(1047.49±105.36) pg/mL、(1679.47±124.42) pg/mL，而正常对照组和阴性对照组各时间点葡聚糖浓度全部稳定于20pg/mL以下，显著低于实验组（F=69.05，P＜0.01）。从实验组(1，3)-β-D-葡聚糖浓度的变化来看，随着真菌性角膜炎病情的进展，(1，3)-β-D-葡聚糖浓度随之升高，而角膜组织中真菌负荷未增高，甚至有减少趋势。
　　 2.治疗组治疗第3、5、10、15、21天(1，3)-β-D-葡聚糖浓度分别为(438.38±79.58) pg/mL、(194.39±23.54) pg/mL、(106.54±19.87)(58.36±10.39) pg/mL，(16.27±3.42) pg/mL;而对照组在病程第3天时浓度为(554.56±92.26) pg/mL，随后逐日升高，至21天时升至(1894.47±156.47) pg/mL，两组间各检测时间点浓度差异均有显著统计学意义（F=217.65，227.96，P＜0.01）。角膜组织中MMP-9 Westernblot检测结果显示，治疗前，两组MMP-9蛋白均有表达，差异无统计学意义（T=1.358，P＞0.05）;至治疗15、21天，对照组蛋白表达量明显增加，而治疗组无升高，甚至开始下降，差异均有显著统计学意义(T=9.396,25.475，P＜0.01)。
　　 结论:1.泪液中(1，3)-β-D-葡聚糖浓度与真菌性角膜炎临床评分有相关性，能够定量评价角膜真菌感染的严重程度，较临床评分等半定量评价手段更优;角膜真菌负荷仅能评价造模是否成功，不能评价角膜炎症程度。
　　 2.泪液(1，3)-β-D-葡聚糖检测作为一种取材简便、准确定量的检测方法，能够量化评价药物治疗真菌性角膜炎疗效。

目录

摘要

引言

第一章 (1，3)-β-D-葡聚糖检测评估真菌性角膜炎病情的研究

前言

1．1 材料与方法

1．2 结果

1．3 讨论

1．4 结论

参考文献

附录

第二章 (1，3)-β-D-葡聚糖检测评价药物治疗真菌性角膜炎疗效的实验研究

前言

2．1 材料与方法

2．2 结果

2．3 讨论

2．4 结论

参考文献

附录

综述 真菌性角膜炎的诊断

攻读学位期间的研究成果

致谢

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