SOCS低甲基化在过敏性紫癜儿童Th17/Treg细胞失衡中的作用研究

摘要

目的：探讨SOCS低甲基化与过敏性紫癜儿童Th17/Treg细胞失衡的关系，进一步探讨HSP的免疫发病机制。
　　方法：选取2014年6月至2015年2月我院心肾免疫儿科收入院的32例急性期HSP患儿作为研究对象，另将在我院儿童保健科门诊健康体检的28例儿童作为正常对照组。采用ELISA法检测血浆IL-6水平；流式细胞术检测外周血CD4+IL-17A+T细胞（Th17细胞）比例、CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）比例和CD4+T细胞磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白平均荧光强度(MFI)；实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测CD4+T细胞SOCS1、SOCS3基因mRNA表达；高分辨率熔解曲线(high-resolution melting，HRM)分析法检测外周血单个核细胞SOCS1基因外显子2、SOCS3基因5’端非翻译区(5’-UTR)可能的STAT3结合位点CpG岛甲基化水平。采用独立样本t或t′检验进行统计学分析。
　　结果：1.HSP儿童血浆IL-6浓度、CD4+T细胞pSTAT3蛋白平均荧光强度（MFI）显著高于正常对照组(t=16.488，P＜0.01； t=9.338，P＜0.01）；2.HSP组CD4+IL-17A+T细胞显著上调（t=7.585，P＜0.05），CD4+CD25+T(Treg)细胞明显低于正常对照组（t=4.582，P＜0.01）,差别有统计学意义；3.HSP组儿童急性期外周血单个核细胞SOCSlmRNA和SOCS3 mRNA水平均显著高于同年龄对照组(t=8.436，P<0.01；t=8.153，P<0.01)，差别有统计学意义；HSP组SOCS1 mRNA表达与Th17/Treg成负相关(r=-0.328,P＜0.05），SOCS3mRNA表达与Th17/Treg成显著负相关（r=-0.413,P＜0.01），CD4+T细胞pSTAT3蛋白表达与Th17/Treg成显著正相关（r=0.410,P＜0.01）；4.急性期HSP组儿童SOCSl基因外显子2、SOCS3基因5’-UTR区可能的STAT结合位点的CpG岛呈低甲基化，而正常对照组呈完全去甲基化状态。
　　结论：SOCS1、SOCS3基因低甲基化致其相对表达不足可能是HSP患儿Th17/Treg失衡的因素之一。

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引言

第一章 材料与方法

1.1实验用主要仪器

1.2 实验主要试剂

1.3 研究对象及分组

1.4 研究方法

1.5 统计学处理

第二章 结 果

2.1 HSP组及正常对照组儿童外周血CD4+IL-17A+T细胞、CD4+CD25+Treg百分率及Th7/Treg比值情况

2.2 HSP组及正常对照组儿童外周血CD4+T细胞 pSTAT3 蛋白平均荧光强度（MFI）、CD4+pSTAT3+ T细胞百分率、及血浆IL-6表达水平

2.3 HSP组及正常对照组儿童外周血单个核细胞SOCS1mRNA和SOCS3mRNA表达情况

2.4 HSP组患儿外周血单个核细胞SOCS1mRNA、SOCS3mRNA表达及CD4+T细胞pSTAT3蛋白MFI与Thl7/Treg比值的相关性分析

2.5 外周血SOCS1和SOCS3基因甲基化检测结果

第三章 讨 论

3.1过敏性紫癜的免疫学发病机制

3.2 IL-6/JAK/STAT3与Th17/Treg细胞失衡

3.3 HSP儿童SOCS表达与Th17/Treg细胞失衡相关性

3.4 HSP患儿SOCS低甲基化与Th17/Tr细胞相关性

结论

参考文献

.综述. SOCS与免疫性疾病

攻读学位期间的研究成果

致谢

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