缺血性脑卒中不同亚型患者血浆miRNAs表达谱变化分析

摘要

目的：
　　研究缺血性脑卒中不同亚型患者血浆中miRNAs（microRNA）表达谱的差异。
　　方法：
　　1.选取2012年11—12月于青岛大学附属医院神经内科就诊的首次发病的16例患者，按TOAST分型将其分为大动脉粥样硬化性（large artery atherosclerotic，LAA）卒中组8例，小动脉闭塞性（small artery occlusion，SAO）卒中组8例，以及同期健康体检者8名作为对照组，应用高通量测序法检测各组血浆中miRNAs的表达谱，筛选出差异表达的miRNAs。
　　2.采用实时荧光定量PCR法对其中的miR-146b-5p、miR-23a-3p、miR-451a进行验证。
　　3.对筛选出的差异表达的miRNAs进行靶基因预测及生物信息学分析。
　　结果：
　　1. LAA组、SAO组及对照组血浆中分别检测到369个miRNAs成熟体。通过miRNAs差异分析，发现let-7a-5p、miR-744-5p等12个miRNAs在3组中均呈现差异性表达（表达差异均大于2倍，P＜0.01）；与对照组比较，miR-126-5p、miR-23a-3p、miR-143-3p等34个miRNAs在LAA组表达显著下调（表达差异均大于2倍，P＜0.01）；在SAO组中miR-1304-3p、miR-451a较对照组表达显著下调（表达差异均大于2倍，P＜0.01），而miR-320a、miR-320b、miR-99b-5p等27个miRNAs较对照组表达则显著上调（表达差异均大于2倍，P＜0.01）。
　　2.实时荧光定量PCR对其中的miR-146b-5p、miR-23a-3p、miR-451a的验证结果与高通量检测结果一致。
　　3.生物信息学分析表明，差异表达的miRNAs调控的靶基因主要与细胞增殖、黏附、代谢等生物学功能相关。
　　结论：
　　LAA型卒中患者及SAO型卒中患者血浆miRNAs表达谱存在明显差异，提示miRNAs可能通过靶基因在LAA及SAO的发病过程中发挥不同的调节作用。

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英文摘要

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引言

第一章 材料

1.1研究对象

1.2 实验仪器及设备

1.3 主要实验试剂

第二章 方法

2.1血液标本采集

2.2高通量测序检测血浆miRNAs

2.3数据处理及分析

2.4荧光定量PCR验证

2.5 miRNA的靶基因预测及功能分析

2.6统计学分析

第三章结果

3.1 3组差异性表达的miRNAs

3.2实时荧光定量PCR验证miRNAs高通量测序结果

3.3差异表达miRNAs 的靶基因预测及生物学过程分析

3.4生物学过程分析结果

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述: microRNA与缺血性脑卒中

攻读学位期间的研究成果

致谢

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