鞘内注射右美托咪定对氯胺酮致新生大鼠脊髓神经毒性的影响

摘要

目的：探讨鞘内注射右美托咪定对氯胺酮致新生大鼠脊髓神经功能和毒性的影响
　　方法：出生后3天的大鼠（P3），体重在8-11克之间，随机进行分组，共分成四组（每组n=26）：对照组(C组)、氯胺酮组(K组)、右美托咪定组(D组)、氯胺酮+右美托咪定组（KD组）。各组分别给予鞘内注射生理盐水、氯胺酮、右美托咪定、氯胺酮+右美托咪定。给予药物后进行机械缩足反应阈值(MWT)测定；完成行为学测试后24h每组处死8只幼鼠，留取L4-5脊髓组织，进行HE染色，光镜下观察病理学改变；选择TUNEL法、免疫组化法测定脊髓 caspase-3表达水平、Fluoro-Jade C染色法检测细胞凋亡情况。7天后每组取8只处死获取脊髓组织检测离子化的钙结合受体分子1（Iba1）表达评估小胶质细胞反应。另有同样每组（n=10）大鼠注药后饲养至生后35天（P35）,通过测定机械缩足反应阈值(MWT)和步态参数分析评估长期脊髓功能改变。
　　结果：⑴HE染色：C组、D组未观察到组织明显形态结构改变 K组可看到组织病变严重，核周染色质出现溶解、消失，核周间隙变宽，形成较多空泡，有明显水肿，同时发生核固缩、胶质细胞聚集病变。KD组比K组观察到病变减轻，细胞减少不明显，形态结构略松散，有少量溶解的核周染色质，形成少量空泡；⑵与C组比较，K组MWT明显升高，同时凋亡细胞计数及 caspase-3表达水平、Iba1表达升高，有统计学差异(P<0.05)，D组MWT、凋亡细胞计数及caspase-3表达水平、Iba1表达差异无统计学意义(P>0.05)；KD组与K组比较，表现为凋亡细胞计数及 caspase-3表达水平、Iba1表达降低(P<0.05)。⑶P35测试部分：与K组比较，KD组 MWT降低，KD组大鼠在爪印面积和爪印强度方面显著增加（p<0.05）。
　　结论：①鞘内注射氯胺酮对新生大鼠有脊髓神经毒性。②右美托咪定可减轻氯胺酮致新生大鼠脊髓神经毒性损伤程度，具有神经保护作用，抑制细胞凋亡是可能的产生保护作用的机制。

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引言

第一章 材料与方法

1.1实验对象和材料

1.1.1实验动物

1.1.2主要仪器和设备

1.1.3主要试剂、药物

1.2 实验方法

1.2.1动物模型的制备

1.2.2实验动物分组和给药

1.2.3 MWT 的测定和步态分析

1.2.4脊髓标本的取材及处理

1.2.5观测指标

1.3 统计学分析

第二章 结 果

2．1 给药前以及给药后 MWT和步态分析

2.1.1机械退缩阈值（MWT）

2.1.2步态分析

2.2 HE染色

2.3 TUNEL法测定细胞凋亡

2.4脊髓caspase-3 表达水平检测

2.5脊髓前角Fluoro-Jade C变性神经元染色

2.6 Iba1蛋白表达检测

第三章 讨 论

3.1鞘内注射模型的制备

3.2机械缩足反应阈值（MWT）和CatWalk 自动定量步态分析

3.3鞘内注射氯胺酮的脊髓功能改变和右美托咪定对其影响

3.4 HE染色

3.5神经细胞凋亡动态观察

3.6离子化的钙结合受体分子 1（Iba1）表达

3.7鞘内注射右美托咪定对氯胺酮致大鼠脊髓神经毒性影响及可能机制

第四章 结 论

附表、附图

参考文献

文献综述:右美托咪定神经保护作用研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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