齐墩果酸经UCP2/FGF-2/p53/TSP-1通路抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

摘要

目的：氧化性低密度脂蛋白（oxygenized low density lipoprotein，ox-LDL）复制大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）的增殖模型，探讨齐墩果酸（oleanolic acid，OA）对VSMCs增殖的抑制作用，并从UCP2/FGF-2/p53/TSP-1信号通路方面研究其作用机制。
　　方法：通过乳酸脱氢酶细胞毒性方法筛选出OA的毒性浓度，细胞计数方法（cell counting kit-8，CCK-8）筛选出ox-LDL的造模浓度以及OA的给药浓度。在模型组的基础上分别加入UCP2抑制剂京尼平、转染FGF-2 siRNA、p53激活剂PRIMA-1研究UCP2/FGF-2/p53/TSP-1通路的级联关系。将实验分为5组，分别为正常组、模型组、OA低浓度组、OA中浓度组、OA高浓度组，提取各组RNA并检测其纯度及浓度，RT-PCR观察各组UCP2、FGF-2、p53、TSP-1 mRNA的表达情况。提取各组蛋白并用BCA法检测蛋白浓度，Western-Blot测定各组UCP2、FGF-2、p53、TSP-1的蛋白表达情况。在给药的基础上加入京尼平，研究OA是否是通过该通路发挥作用的。
　　结果：通过乳酸脱氢酶细胞毒性检测方法筛选出的OA毒性浓度为40μM，通过CCK-8检测，50μg/ml ox-LDL能获得最大细胞增殖率，由此作为造模浓度。在模型组中加入UCP2抑制剂京尼平后与原模型组比较发现，FGF-2表达有所降低，p53、TSP-1有所升高，表明UCP2是它们的上游因子，在模型组中加入FGF-2 siRNA后与原模型组比较发现，UCP2无明显变化，而p53和TSP-1均有所升高，表明FGF-2为UCP2下游基因，是p53、TSP-1的上游基因，在模型组中加入p53激活剂PRIMA-1后与原模型组比较发现，UCP2、FGF-2无明显变化，TSP-1表达升高，说明p53是UCP2、FGF-2下游基因，是TSP-1上游基因。mRNA结果显示，模型组UCP2、FGF-2表达水平升高，而p53、TSP-1表达水平降低，药物OA能改善这一现状，Western Blot结果与此一致。此外，在给药30μM基础上加入京尼平后发现，与原来UCP2抑制剂组和OA组相比，各蛋白的表达没有发生显著性变化。
　　结论：50μg/ml ox-LDL能够复制VSMCs增殖模型，OA的毒性浓度为40μM。UCP2/FGF-2/p53/TSP-1存在级联关系，OA能够抑制VSMCs的异常增殖，其机制涉及OA对UCP2/FGF-2/p53/TSP-1信号通路的调控。